| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 第1章 绪论 | 第12-22页 |
| 1.1 DCA简介 | 第12-13页 |
| 1.2 热带假丝酵母的工业应用 | 第13-15页 |
| 1.3 脂肪酸转运蛋白研究概述 | 第15-19页 |
| 1.3.1 FATPs的发现和命名 | 第15-16页 |
| 1.3.2 FATPs的分子结构 | 第16页 |
| 1.3.3 FATPs的作用机制 | 第16-19页 |
| 1.4 本课题的立题背景及研究内容 | 第19-22页 |
| 第2章 ctfat1p基因单拷贝缺失基因工程菌的构建及性能的研究 | 第22-36页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 实验材料 | 第22-24页 |
| 2.2.1 菌种 | 第22页 |
| 2.2.2 引物 | 第22-23页 |
| 2.2.3 培养基及其他实验用材 | 第23-24页 |
| 2.2.4 分子试剂盒与分子试剂 | 第24页 |
| 2.2.5 仪器与设备 | 第24页 |
| 2.3 实验方法 | 第24-31页 |
| 2.3.1 冻干菌种的恢复培养 | 第24-25页 |
| 2.3.2 C. tropicalis 1798 基因组DNA的提取 | 第25页 |
| 2.3.3 pPIC9K质粒的提取 | 第25-26页 |
| 2.3.4 C. tropicalis 1798 对G418的敏感性实验 | 第26页 |
| 2.3.5 目的基因的扩增及重组同源性片段ctfat1p1-kanr的制备 | 第26-28页 |
| 2.3.6 回收产物的酶切及浓缩 | 第28-29页 |
| 2.3.7 电转感受态细胞制备 | 第29-30页 |
| 2.3.8 电转化及阳性重组菌株的鉴定 | 第30页 |
| 2.3.9 原始菌株和重组菌株的发酵培养与二元酸的测量 | 第30-31页 |
| 2.3.10 原始菌株和重组菌株生长速率分析 | 第31页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第31-35页 |
| 2.4.1 基因组DNA及质粒的提取结果 | 第31-32页 |
| 2.4.2 基因敲除片段ctfat1p1-kanr的构建、电转化及鉴定 | 第32-33页 |
| 2.4.3 以油脂为底物C. tropicalis 1798 和C. tropicalis 1798Δctfat1p的发酵验证 | 第33页 |
| 2.4.4 C. tropicalis 1798 和C. tropicalis 1798Δctfat1p生长速率分析 | 第33-35页 |
| 2.5 总结 | 第35-36页 |
| 第3章 ctfat1p基因双拷贝缺失基因工程菌的构建及性能的研究 | 第36-44页 |
| 3.1 引言 | 第36页 |
| 3.2 实验材料 | 第36-37页 |
| 3.2.1 菌种 | 第36页 |
| 3.2.2 引物 | 第36页 |
| 3.2.3 培养基 | 第36页 |
| 3.2.4 分子试剂盒与分子试剂 | 第36-37页 |
| 3.2.5 仪器与设备 | 第37页 |
| 3.3 实验方法 | 第37-39页 |
| 3.3.1 C. tropicalis 1798 基因组DNA的提取 | 第37页 |
| 3.3.2 pFA6a-hphMX-tetO-Pcyc1-3xFLAG质粒的提取 | 第37页 |
| 3.3.3 C. tropicalis 1798Δctfat1p对潮霉素B的敏感性实验 | 第37页 |
| 3.3.4 目的基因的扩增及重组载体的构建 | 第37-39页 |
| 3.3.5 电转感受态细胞制备 | 第39页 |
| 3.3.6 电转化及阳性重组菌株的鉴定 | 第39页 |
| 3.3.7 双拷贝敲除菌株生长速率分析 | 第39页 |
| 3.3.8 双拷贝敲除菌株的发酵培养与二元酸的测量 | 第39页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第39-42页 |
| 3.4.1 基因敲除载体pZERO-Blunt-ctfat1p2-hygroB的构建、电转化及鉴定 | 第39-40页 |
| 3.4.2 以油脂为底物C. tropicalis 1798 (ctfat1p-/ctfat1p-)的发酵验证 | 第40-41页 |
| 3.4.3 C. tropicalis 1798 (ctfat1p-/ctfat1p-)生长速率分析 | 第41-42页 |
| 3.5 总结 | 第42-44页 |
| 第4章 ctfat1p基因多拷贝基因重组菌的构建及性能的研究 | 第44-52页 |
| 4.1 引言 | 第44页 |
| 4.2 实验材料 | 第44-45页 |
| 4.2.1 菌种与载体 | 第44页 |
| 4.2.2 引物 | 第44-45页 |
| 4.2.3 培养基 | 第45页 |
| 4.2.4 分子试剂盒与分子试剂 | 第45页 |
| 4.2.5 仪器与设备 | 第45页 |
| 4.3 实验方法 | 第45-48页 |
| 4.3.1 目的基因的扩增 | 第45页 |
| 4.3.2 酶切 | 第45-46页 |
| 4.3.3 去磷酸化 | 第46页 |
| 4.3.4 一步法定向克隆 | 第46-47页 |
| 4.3.5 转化 | 第47-48页 |
| 4.3.6 阳性重组菌株的筛选 | 第48页 |
| 4.3.7 pZERO-Blunt-ctfat1p质粒的提取 | 第48页 |
| 4.3.8 电转感受态细胞制备 | 第48页 |
| 4.3.9 电转化及阳性重组菌株的鉴定 | 第48页 |
| 4.3.10 重组菌株的发酵培养与二元酸的测量 | 第48页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第48-51页 |
| 4.4.1 重组表达质粒构建验证 | 第48-49页 |
| 4.4.2 重组表达质粒ctfat1p转化筛选鉴定 | 第49-50页 |
| 4.4.3 以油脂为底物重组菌株的发酵验证 | 第50-51页 |
| 4.5 总结 | 第51-52页 |
| 第5章 重组菌C. tropicalis 1798+ctfat1p发酵培养基的优化 | 第52-58页 |
| 5.1 引言 | 第52页 |
| 5.2 实验材料 | 第52-53页 |
| 5.2.1 菌种 | 第52页 |
| 5.2.2 培养基 | 第52-53页 |
| 5.2.3 仪器与设备 | 第53页 |
| 5.3 实验方法 | 第53-54页 |
| 5.3.1 工程菌C. tropicalis 1798+ctfat1p的发酵培养与二元酸的测量 | 第53页 |
| 5.3.2 利用PB法设计单因素实验 | 第53页 |
| 5.3.3 正交试验设计 | 第53页 |
| 5.3.4 摇瓶验证实验 | 第53-54页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第54-57页 |
| 5.4.1 PB法实验确定单因素 | 第54-55页 |
| 5.4.2 正交试验结果 | 第55-56页 |
| 5.4.3 摇瓶验证实验结果 | 第56-57页 |
| 5.5 总结 | 第57-58页 |
| 第6章 结论及展望 | 第58-60页 |
| 6.1 结论 | 第58-59页 |
| 6.2 展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-68页 |
| 致谢 | 第68-70页 |
| 硕士期间主要科研成果 | 第70页 |
