| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 引言 | 第14-27页 |
| 1.1 PRRSV病原学概述 | 第14-21页 |
| 1.1.1 病毒的基因组结构特征 | 第15页 |
| 1.1.2 病毒的编码的蛋白 | 第15-17页 |
| 1.1.3 病毒感染细胞机制 | 第17-19页 |
| 1.1.4 PRRSV进入宿主细胞RIG-I信号通路 | 第19-20页 |
| 1.1.5 PRRSV进入宿主细胞TLR3信号通路 | 第20页 |
| 1.1.6 PRRSV进入宿主细胞NF-κB信号通路 | 第20-21页 |
| 1.2 反向遗传操作技术 | 第21-23页 |
| 1.2.1 RNA病毒反向遗传学技术 | 第21-22页 |
| 1.2.2 RNA病毒反向遗传学的研究进展 | 第22页 |
| 1.2.3 PRRSV反向遗传学的研究进展 | 第22-23页 |
| 1.3 分选流式细胞术 | 第23-24页 |
| 1.3.1 流式细胞术的原理 | 第23页 |
| 1.3.2 流式细胞术的研究进展 | 第23-24页 |
| 1.4 蛋白质组学概述 | 第24-26页 |
| 1.4.1 常用的蛋白质组学研究技术 | 第24-26页 |
| 1.4.2 Shotgun定性质谱的研究进展 | 第26页 |
| 1.4.3 Label-free定量质谱的研究进展 | 第26页 |
| 1.5 研究目的和意义 | 第26-27页 |
| 第二章 重组EGFP猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性克隆的构建 | 第27-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-28页 |
| 2.1.1 病毒株 | 第27页 |
| 2.1.2 细胞 | 第27页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第28页 |
| 2.1.5 引物及设计 | 第28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-31页 |
| 2.2.1 重组病毒感染性克隆的构建 | 第28-29页 |
| 2.2.2 病毒拯救及纯化传代 | 第29页 |
| 2.2.3 重组病毒的PCR鉴定 | 第29-30页 |
| 2.2.4 重组病毒报告基因表达的鉴定 | 第30页 |
| 2.2.5 重组病毒的间接免疫荧光的鉴定 | 第30页 |
| 2.2.6 重组病毒的生物学特性鉴定 | 第30-31页 |
| 2.3 结果 | 第31-35页 |
| 2.3.1 EGFP重组PRRSV的全长克隆的构建与感染性检测 | 第31-33页 |
| 2.3.2 重组病毒与亲本病毒结构蛋白表达分析结果 | 第33页 |
| 2.3.3 重组病毒与亲本病毒的生物学特征分析结果 | 第33-35页 |
| 2.4 讨论 | 第35-36页 |
| 第三章与PRRSV相互作用的PAM细胞膜蛋白的筛选及验证 | 第36-58页 |
| 3.1 材料 | 第36-37页 |
| 3.1.1 病毒株 | 第36页 |
| 3.1.2 细胞 | 第36页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第36-37页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第37页 |
| 3.2 方法 | 第37-42页 |
| 3.2.1 PAM细胞分离培养 | 第37页 |
| 3.2.2 Shotgun质谱分析重组病毒感染PAM细胞的制备 | 第37-38页 |
| 3.2.3 Label-free质谱分析亲本病毒感染PAM细胞的制备 | 第38页 |
| 3.2.4 Shotgun定性质谱分析 | 第38-39页 |
| 3.2.5 Label-free定量质谱分析 | 第39-41页 |
| 3.2.6 Shotgun质谱分析目的蛋白的过表达验证 | 第41-42页 |
| 3.2.7 Label-free质谱分析目的蛋白WB验证 | 第42页 |
| 3.3 结果 | 第42-51页 |
| 3.3.1 PAM细胞的分离培养 | 第42-43页 |
| 3.3.2 重组病毒感染PAM细胞 | 第43-44页 |
| 3.3.3 绿色荧光信号检测 | 第44页 |
| 3.3.4 Shotgun定性质谱分析结果 | 第44-46页 |
| 3.3.5 Label-free定量质谱分析结果 | 第46-50页 |
| 3.3.6 Shotgun质谱分析目的蛋白的过表达验证结果 | 第50页 |
| 3.3.7 Label-free质谱分析目的蛋白的WB验证结果 | 第50-51页 |
| 3.4 讨论 | 第51-58页 |
| 第四章 全文总结 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 作者简介 | 第68页 |
