| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-21页 |
| ·引言 | 第9页 |
| ·RANKL/RANK 的研究现状 | 第9-16页 |
| ·RANKL/RANK 的发现 | 第9-13页 |
| ·RANKL/RANK 的简介 | 第9-12页 |
| ·RANKL/RANK/OPG 的发现 | 第12-13页 |
| ·RANKL/RANK 的结构特性 | 第13-14页 |
| ·RANKL/RANK/OPG 系统的功能 | 第14-15页 |
| ·RANKL 的三维结构 | 第15-16页 |
| ·蛋白质的表达纯化 | 第16-18页 |
| ·SPR-Biacore 分析蛋白与蛋白之间的相互作用 | 第18-19页 |
| ·ATTANA CELL 200 分析蛋白与细胞之间的相互作用 | 第19-20页 |
| ·RAW264.7 细胞系 | 第20-21页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第21-38页 |
| ·实验材料 | 第21-22页 |
| ·试剂 | 第21-22页 |
| ·实验仪器及软件 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-38页 |
| ·Trizol 试剂提取小鼠RAW264.7 细胞总RNA | 第22-24页 |
| ·用两步法RT-PCR 试剂盒将总mRNA 逆转录为cDNA | 第24-25页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测PCR 产物 | 第25-26页 |
| ·用胶回收试剂盒纯化琼脂糖凝胶PCR 产物 | 第26页 |
| ·载体和PCR 产物的限制性内切酶作用 | 第26-27页 |
| ·载体与酶切PCR 产物的连接 | 第27页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| ·连接产物的转化 | 第28-29页 |
| ·转化产物的鉴定 | 第29-30页 |
| ·目的蛋白的诱导与表达 | 第30-31页 |
| ·GST-RANKL 蛋白的纯化 | 第31页 |
| ·RANK 包涵体蛋白的纯化 | 第31-32页 |
| ·变性蛋白质凝胶电泳（SDS-PAGE）检测蛋白 | 第32-33页 |
| ·分子筛层析法纯化蛋白 | 第33-34页 |
| ·RANKL/RANK 交联实验 | 第34页 |
| ·pull-down 实验检测蛋白结合 | 第34-35页 |
| ·蛋白迁移实验 | 第35页 |
| ·抗血清阻断RAW264.7 细胞分化实验 | 第35-36页 |
| ·BIAcore 实验检测RANKL 和RANK 的亲和平衡常数 | 第36-37页 |
| ·ATTANA CELL 200 分析RANKL 与细胞的亲和平衡常数 | 第37-38页 |
| 第三章 实验结果和讨论 | 第38-57页 |
| ·实验结果 | 第38-54页 |
| ·RANKL 蛋白的制备 | 第38-41页 |
| ·RANKL 蛋白的表达与纯化 | 第38-39页 |
| ·使用FPLC（快速蛋白液相色谱技术）进一步纯化RANKL 蛋白 | 第39页 |
| ·交联实验证明RANKL 是以三聚体形式存在 | 第39-40页 |
| ·小鼠 RANKL 蛋白促进 RAW264.7 细胞分化和抗血清阻断分化实验 | 第40-41页 |
| ·RANK 蛋白的制备 | 第41-46页 |
| ·小鼠RAW264.7 细胞总RNA 的提取 | 第41页 |
| ·通过RT-PCR 方法获得小鼠RANK 蛋白的基因 | 第41-42页 |
| ·成功构建RANK 表达载体 | 第42-43页 |
| ·RANK 蛋白的表达与纯化 | 第43-45页 |
| ·RANK 蛋白的交联实验 | 第45-46页 |
| ·RANKL、RANK 蛋白的相互结合的检测 | 第46-48页 |
| ·pull-down 检测RANKL/RANL 的相互结合 | 第46-47页 |
| ·蛋白迁移实验进一步检测RANKL/RANK 的相互结合 | 第47-48页 |
| ·Biacore 实验测定小鼠RANKL 和RANK 蛋白之间的相互作用 | 第48-50页 |
| ·ATTANA CELL 200 分析RANKL 蛋白与细胞之间的亲和力 | 第50-54页 |
| ·实验讨论与分析 | 第54-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
