| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-23页 |
| ·枯草芽胞杆菌研究历史 | 第10-11页 |
| ·枯草芽胞杆菌遗传操作体系常用载体及转化方法 | 第11-12页 |
| ·利用同源重组系统对细菌进行遗传操作的原理及应用 | 第12-13页 |
| ·DNA 错配修复系统的原理及对同源重组系统的影响 | 第13-15页 |
| ·噬菌体重组酶介导的同源重组系统 | 第15-17页 |
| ·噬菌体同源重组操作原理 | 第15页 |
| ·噬菌体重组酶介导的同源重组应用策略 | 第15-17页 |
| ·同源重组技术在构建基因工程菌中的应用 | 第17-21页 |
| ·upp 筛选系统 | 第21-22页 |
| ·upp 筛选系统的机理 | 第21页 |
| ·正筛选系统 | 第21页 |
| ·负筛选系统 | 第21-22页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第22-23页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第23-39页 |
| ·实验材料 | 第23-27页 |
| ·细菌、质粒与生化试剂 | 第23-24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24页 |
| ·常用试剂 | 第24-25页 |
| ·主要培养基 | 第25-27页 |
| ·常用抗生素 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-39页 |
| ·引物 | 第27页 |
| ·噬菌体SPP1 的培养及其染色体的提取 | 第27-28页 |
| ·PCR 反应体系与条件 | 第28-29页 |
| ·限制性内切酶酶切PCR 产物和载体 | 第29-30页 |
| ·目的片段与表达载体的连接 | 第30页 |
| ·大肠杆菌化学转化DH5α感受态细胞的制备及其转化 | 第30-31页 |
| ·重组质粒的鉴定及其插入片段的序列测序 | 第31-32页 |
| ·大肠杆菌化学转化BL21(DE3)感受态细胞的制备及其转化 | 第32-33页 |
| ·枯草芽胞杆菌W168 电转化感受态细胞的制备及其转化 | 第33页 |
| ·枯草芽胞杆菌W168 化学转化法感受态细胞的制备与转化 | 第33页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第33-34页 |
| ·Western Blot 检测 | 第34-36页 |
| ·寡核苷酸链的设计与合成 | 第36-39页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第39-60页 |
| ·枯草芽胞杆菌 BS029(W168△mutS lacA::gp34.1-35-36)的构建 | 第39-43页 |
| ·噬菌体SPP1 染色体的提取与鉴定 | 第39-40页 |
| ·噬菌体SPP1 重组酶基因gp34.1-35-36 的克隆 | 第40页 |
| ·重组质粒pWYE199 ( pAX01-GP34.1-GP35-GP36 )的构建 | 第40-42页 |
| ·枯草芽胞杆菌 BS029(W168△mutS lacA::gp34.1-35-36)的构建 | 第42-43页 |
| ·重组蛋白GP34.1 的表达与纯化 | 第43-46页 |
| ·pET28a-gp34.1 的构建 | 第43-45页 |
| ·重组蛋白GP34.1 的诱导表达与纯化 | 第45-46页 |
| ·重组蛋白GP35 的表达与纯化 | 第46-49页 |
| ·pET28a-gp35 的构建 | 第46-48页 |
| ·重组蛋白GP35 的诱导表达与纯化 | 第48-49页 |
| ·重组蛋白GP36 的表达与纯化 | 第49-52页 |
| ·pET28a-gp36 的构建 | 第49-51页 |
| ·重组蛋白GP36 的诱导表达与纯化 | 第51-52页 |
| ·Western-blot 检测噬菌体重组相关蛋白在枯草芽胞杆菌中的表达 | 第52-53页 |
| ·枯草芽胞杆菌尿嘧啶磷酸核糖基转移酶upp 基因的改造 | 第53-56页 |
| ·寡核苷酸片段的设计 | 第53页 |
| ·寡核苷酸片段的转化 | 第53-55页 |
| ·重组子的测序鉴定 | 第55-56页 |
| ·讨论 | 第56-60页 |
| 第四章 小结与展望 | 第60-62页 |
| ·小结 | 第60页 |
| ·展望 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 附录 | 第67-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
