| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 第一章 真菌几丁质合酶的研究进展 | 第10-20页 |
| 1.1 前言 | 第10-11页 |
| 1.2 真菌几丁质合酶基因 | 第11-12页 |
| 1.3 几丁质合酶的分类与结构 | 第12-14页 |
| 1.4 几丁质合酶的生物学功能 | 第14-15页 |
| 1.5 几丁质合酶与致病性的关系 | 第15页 |
| 1.6 展望 | 第15-16页 |
| 参考文献 | 第16-20页 |
| 第二章 几丁质合酶抑制剂正筛选模型的建立 | 第20-28页 |
| 2.1 前言 | 第20-21页 |
| 2.2 材料与方法 | 第21-22页 |
| 2.2.1 菌株、培养基和试剂 | 第21页 |
| 2.2.2 双层平板的制备 | 第21-22页 |
| 2.2.3 菌株YFK32对CFW敏感性测定 | 第22页 |
| 2.2.4 几丁质合酶抑制剂增加酵母对CFW的抗性 | 第22页 |
| 2.2.5 几丁质合酶抑制剂的正筛选 | 第22页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第22-26页 |
| 2.3.1 CFW对YFK32的抑制作用 | 第22-23页 |
| 2.3.2 几丁质合酶抑制剂正筛选模型的建立 | 第23-25页 |
| 2.3.3 正筛选模型灵敏度测试 | 第25-26页 |
| 2.4 展望 | 第26页 |
| 参考文献: | 第26-28页 |
| 第三章 酵母几丁质合酶抑制剂负筛选模型的构建 | 第28-41页 |
| 3.1 前言 | 第28-29页 |
| 3.2 材料与方法 | 第29-36页 |
| 3.2.1 菌株、质粒、引物、培养基和试剂 | 第29-32页 |
| 3.2.2 重叠PCR构建基因敲除构件(Gene Disruption Cassette) | 第32-33页 |
| 3.2.3 基因敲除质粒的构建 | 第33-34页 |
| 3.2.4 酿酒酵母感受态的制备和转化 | 第34页 |
| 3.2.5 克隆PCR鉴定 | 第34-35页 |
| 3.2.6 几丁质合酶基因敲除酵母的构建 | 第35-36页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第36-39页 |
| 3.3.1 PCR合成几丁质合酶基因敲除构件 | 第36-37页 |
| 3.3.2 基因敲除质粒的构建 | 第37页 |
| 3.3.3 基因敲除酵母菌株的构建 | 第37-39页 |
| 3.3.4 突变子的表型鉴定 | 第39页 |
| 3.4 展望 | 第39-40页 |
| 参考文献: | 第40-41页 |
| 第四章 几丁质合酶抑制剂的筛选 | 第41-48页 |
| 4.1 前言 | 第41-42页 |
| 4.2 材料与方法 | 第42-43页 |
| 4.2.1 菌株、培养基和试剂 | 第42页 |
| 4.2.2 96孔板法筛选抗真菌活性物质 | 第42-43页 |
| 4.2.3 滤纸片法筛选中药提取物的抗真菌活性物质 | 第43页 |
| 4.2.4 正筛选法筛选几丁质合酶抑制剂 | 第43页 |
| 4.2.5 抑制剂的靶标性分析 | 第43页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第43-47页 |
| 4.3.1 96孔板筛选抑制剂 | 第43-44页 |
| 4.3.2 滤纸片法筛选几丁质合酶 | 第44-45页 |
| 4.3.3 正筛选法对中药提取物进行筛选 | 第45-46页 |
| 4.3.4 抑制剂的靶标性分析 | 第46-47页 |
| 4.4 展望 | 第47页 |
| 参考文献: | 第47-48页 |
| 第五章 灰霉几丁质合酶chs V的功能研究 | 第48-59页 |
| 5.1 前言 | 第48-49页 |
| 5.2 材料与方法 | 第49-54页 |
| 5.2.1 菌株、质粒、培养基、试剂和引物 | 第49-53页 |
| 5.2.2 灰霉基因组DNA的提取 | 第53页 |
| 5.2.3 灰霉几丁质合酶Bcchs V基因敲除用质粒的构建 | 第53页 |
| 5.2.4 质粒转化农杆菌以及农杆菌介导的灰霉转化 | 第53页 |
| 5.2.5 转化子的分子鉴定 | 第53-54页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第54-57页 |
| 5.3.1 灰霉基因组的提取 | 第54-55页 |
| 5.3.2 几丁质合酶chs V基因上、下游同源序列的扩增 | 第55-56页 |
| 5.3.3 含chs V基因敲除构件的质粒构建及亚克隆 | 第56页 |
| 5.3.4 农杆菌介导的灰霉转化 | 第56-57页 |
| 5.4 展望 | 第57页 |
| 参考文献: | 第57-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第60页 |
