| 摘要 | 第7-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略词(Abbreviation) | 第13-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-32页 |
| 1.1 里氏木霉纤维素降解酶系 | 第14-16页 |
| 1.2 里氏木霉纤维素酶诱导表达调控机制 | 第16-18页 |
| 1.2.1 纤维素酶起始表达 | 第16-17页 |
| 1.2.2 纤维素酶基因的转录调控 | 第17-18页 |
| 1.3 碳源代谢阻遏 | 第18-30页 |
| 1.3.1. 葡萄糖信号感应以及信号传递 | 第19-22页 |
| 1.3.2. 阻遏蛋白对CCR信号的响应 | 第22-27页 |
| 1.3.3. 辅阻遏复合物Cyc8-Tup1 | 第27-30页 |
| 1.4 论文主要内容 | 第30-32页 |
| 第二章 cre1敲除及过表达菌株构建并性状分析 | 第32-58页 |
| 2.1 实验材料及试剂 | 第32-37页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第32-33页 |
| 2.1.2 引物及序列 | 第33-35页 |
| 2.1.3 主要试剂及仪器 | 第35页 |
| 2.1.4 主要培养基 | 第35-36页 |
| 2.1.5 主要试剂 | 第36-37页 |
| 2.2 实验方法 | 第37-44页 |
| 2.2.1 菌种及质粒保存方法 | 第37页 |
| 2.2.2 里氏木霉培养方式 | 第37-38页 |
| 2.2.3 qPCR反应 | 第38-39页 |
| 2.2.4 Gateway敲除系统 | 第39-40页 |
| 2.2.5 里氏木霉转化 | 第40页 |
| 2.2.6 里氏木霉基因组提取 | 第40-41页 |
| 2.2.7 酶活测定 | 第41-43页 |
| 2.2.8 里氏木霉RNA提取 | 第43页 |
| 2.2.9 RNA中DNA的去除 | 第43-44页 |
| 2.2.10 RNA反转录 | 第44页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第44-55页 |
| 2.3.1 cre1敲除载体构建 | 第44-45页 |
| 2.3.2 cre1敲除盒真菌转化及Acre1木霉转化子验证 | 第45-46页 |
| 2.3.3 △cre1生长检测 | 第46-47页 |
| 2.3.4 △cre1在葡萄糖上纤维素酶基因转录 | 第47-48页 |
| 2.3.5 △cre1在Avicel上纤维素酶基因转录 | 第48-49页 |
| 2.3.6 △cre1在乳糖上纤维素酶基因转录 | 第49-50页 |
| 2.3.7 cre1过表达载体构建 | 第50-51页 |
| 2.3.8 cre1过表达载体真菌转化及木霉转化子挑选 | 第51-52页 |
| 2.3.9 cre1过表达菌株生长测定 | 第52-55页 |
| 2.3.10 cre1过表达影响纤维素酶酶活 | 第55页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第55-58页 |
| 第三章 Cre1胞内定位及Cre1结合位点突变对纤维素酶基因转录的作用研究 | 第58-69页 |
| 3.1 实验材料及试剂 | 第58-60页 |
| 3.1.1 菌株及质粒 | 第58-59页 |
| 3.1.2 引物及序列 | 第59-60页 |
| 3.2 实验方法 | 第60页 |
| 3.2.1 酶活测定 | 第60页 |
| 3.2.2 基因转录分析 | 第60页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第60-68页 |
| 3.3.1 nGFP-Cre1载体构建 | 第60-61页 |
| 3.3.2 nGFP-Cre1菌株构建 | 第61-62页 |
| 3.3.3 Cre1胞内定位 | 第62-64页 |
| 3.3.4 cbh1启动子上Cre1结合位点突变体载体构建 | 第64-66页 |
| 3.3.5 Pcbh1 MT木霉菌株构建 | 第66-67页 |
| 3.3.6 Pcbh1 MT菌株表型分析 | 第67-68页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第68-69页 |
| 第四章 Trtc1的鉴定及其对纤维素酶基因转录调控的功能分析 | 第69-86页 |
| 4.1 实验材料及试剂 | 第69-72页 |
| 4.1.1 菌株及质粒 | 第69-70页 |
| 4.1.2 引物及序列 | 第70-71页 |
| 4.1.3 主要试剂及仪器 | 第71-72页 |
| 4.2 实验方法 | 第72-73页 |
| 4.2.1 CBH Ⅰ Western检测 | 第72-73页 |
| 4.2.2 酶活测定 | 第73页 |
| 4.2.3 基因转录分析 | 第73页 |
| 4.2.4 菌体生长测定 | 第73页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第73-84页 |
| 4.3.1 里氏木霉中Tup1p同源蛋白的鉴定 | 第73-74页 |
| 4.3.2 trtc1启动子置换载体构建 | 第74页 |
| 4.3.3 trtc1启动子置换载体真菌转化及木霉转化子挑选 | 第74-75页 |
| 4.3.4 trtc1缺失及过表达菌株生长测定 | 第75-80页 |
| 4.3.5 trtc1缺失及过表达对Avicel上纤维素酶诱导表达的影响 | 第80-83页 |
| 4.3.6 trtc1缺失及过表达菌株在Avicel上的纤维素酶基因转录 | 第83-84页 |
| 4.3.7 trtc1缺失及过表达菌株在Avicel培养条件下xyr1、cre1的转录 | 第84页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第84-86页 |
| 全文总结与展望 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-98页 |
| 致谢 | 第98-99页 |
| 附件 | 第99页 |
