| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 第一章 绪论 | 第13-32页 |
| 1.1 2,3-丁二醇的性质 | 第13页 |
| 1.2 2,3-丁二醇的生产方法 | 第13-16页 |
| 1.2.1 化学法生产2,3-丁二醇 | 第14页 |
| 1.2.2 微生物法生产2,3-丁二醇 | 第14-16页 |
| 1.3 醇脱氢酶的分类及特征 | 第16-19页 |
| 1.3.1 含Fe~(2+)醇脱氢酶的结构及功能特点 | 第17页 |
| 1.3.2 含Zn~(2+)醇脱氢酶的结构及功能特点 | 第17-18页 |
| 1.3.3 不含金属离子醇脱氢酶的结构及功能特点 | 第18-19页 |
| 1.4 2,3-丁二醇脱氢酶 | 第19-23页 |
| 1.4.1 (2S,3S)-2,3-丁二醇脱氢酶 | 第20-21页 |
| 1.4.2 (2R,3R)-2,3-丁二醇脱氢酶 | 第21-22页 |
| 1.4.3 meso-2,3-丁二醇脱氢酶 | 第22-23页 |
| 1.5 辅酶循环体系的构建 | 第23-26页 |
| 1.5.1 双底物偶联法辅酶再生 | 第24-25页 |
| 1.5.2 双酶偶联法辅酶再生 | 第25-26页 |
| 1.6 本论文的研究背景、内容及意义 | 第26-27页 |
| 参考文献 | 第27-32页 |
| 第二章 醇脱氢酶ReBDH-S与ReBDH-M的基因克隆与表达 | 第32-53页 |
| 2.1 引言 | 第32-33页 |
| 2.2 实验材料 | 第33-35页 |
| 2.2.1 菌种及质粒载体 | 第33页 |
| 2.2.2 试剂与材料 | 第33-34页 |
| 2.2.3 培养基 | 第34页 |
| 2.2.4 缓冲液及洗脱液 | 第34页 |
| 2.2.5 主要仪器 | 第34-35页 |
| 2.3 试验方法 | 第35-40页 |
| 2.3.1 红串红球菌发酵及终端产物检测 | 第35-36页 |
| 2.3.2 目的基因的克隆 | 第36-38页 |
| 2.3.3 重组质粒pEASY-E1-bdh的表达 | 第38-39页 |
| 2.3.4 重组蛋白的纯化 | 第39页 |
| 2.3.5 重组蛋白天然分子量的检测 | 第39页 |
| 2.3.6 重组蛋白ReBDH-S与ReBDH-M结构分析 | 第39-40页 |
| 2.4 结果与分析 | 第40-50页 |
| 2.4.1 R.erythropolis WZ010发酵终端产物的检测 | 第40-41页 |
| 2.4.2 ReBDH-S与ReBDH-M的基因克隆及分子特征 | 第41-42页 |
| 2.4.3 ReBDH-S与ReBDH-M的表达及纯化 | 第42-45页 |
| 2.4.4 重组ReBDH-S与ReBDH-M天然分子量的测定 | 第45-46页 |
| 2.4.5 重组蛋白一、二、三级结构分析 | 第46-50页 |
| 2.5 本章讨论与小结 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-53页 |
| 第三章 醇脱氢酶ReBDH-S与ReBDH-M的酶学性质表征 | 第53-72页 |
| 3.1 引言 | 第53-54页 |
| 3.2 实验材料 | 第54-56页 |
| 3.2.1 菌种 | 第54页 |
| 3.2.2 试剂与材料 | 第54页 |
| 3.2.3 培养基 | 第54页 |
| 3.2.4 缓冲液及洗脱液 | 第54-55页 |
| 3.2.5 主要仪器 | 第55-56页 |
| 3.3 试验方法 | 第56-58页 |
| 3.3.1 重组酶活力的测定 | 第56页 |
| 3.3.2 重组酶的酶学性质 | 第56-57页 |
| 3.3.3 重组酶立体选择性的确立 | 第57-58页 |
| 3.4 结果与分析 | 第58-69页 |
| 3.4.1 重组ReBDH-S与REBDH-M的底物特异性 | 第58-61页 |
| 3.4.2 温度及pH值对重组酶的影响 | 第61-62页 |
| 3.4.3 金属离子及有机助溶剂对酶活力的影响 | 第62-66页 |
| 3.4.4 重组酶ReBDH-S与ReBDH-M的动力学参数 | 第66-67页 |
| 3.4.5 重组酶ReBDH-S与ReBDH-M立体选择性的确立 | 第67-69页 |
| 3.5 本章讨论与小结 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-72页 |
| 第四章 重组酶在生物催化方面的应用探索 | 第72-88页 |
| 4.1 引言 | 第72-73页 |
| 4.2 实验材料 | 第73-74页 |
| 4.2.1 菌种及质粒载体 | 第73页 |
| 4.2.2 培养基 | 第73-74页 |
| 4.2.3 缓冲液 | 第74页 |
| 4.2.4 试剂与材料 | 第74页 |
| 4.2.5 主要仪器 | 第74页 |
| 4.3 实验方法 | 第74-78页 |
| 4.3.1 甲酸脱氢酶FDHCB和FDHP101的制备 | 第75页 |
| 4.3.2 酶法合成手性醇 | 第75-77页 |
| 4.3.3 酶法不对称合成手性醇的结果检测 | 第77-78页 |
| 4.4 结果与分析 | 第78-84页 |
| 4.4.1 FDH的制备 | 第78-80页 |
| 4.4.2 手性醇的不对称合成 | 第80-84页 |
| 4.5 本章讨论与小结 | 第84-86页 |
| 参考文献 | 第86-88页 |
| 第五章 总结与展望 | 第88-91页 |
| 5.1 结论 | 第88-89页 |
| 5.2 展望 | 第89-91页 |
| 攻读硕士学位期间论文发表情况 | 第91-92页 |
| 致谢 | 第92页 |
