| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 绪论 | 第11-21页 |
| 1.1 大肠埃希菌概述 | 第11页 |
| 1.2 大肠埃希菌致病机理 | 第11-13页 |
| 1.2.1 产肠毒素大肠埃希菌（ETEC） | 第11-12页 |
| 1.2.2 产类志贺毒素大肠埃希菌（SLTEC） | 第12页 |
| 1.2.3 肠道致病性大肠埃希菌（EPEC） | 第12-13页 |
| 1.2.4 败血性大肠埃希菌（SEPEC） | 第13页 |
| 1.2.5 尿道致病性大肠埃希菌（UPEC） | 第13页 |
| 1.3 大肠埃希菌疾病的防治 | 第13-18页 |
| 1.3.1 抗生素治疗 | 第13-14页 |
| 1.3.2 中药与预防性防治 | 第14-15页 |
| 1.3.3 疫苗治疗 | 第15-18页 |
| 1.4 大肠埃希菌外膜蛋白OMPC研究 | 第18页 |
| 1.5 论文研究思路及意义 | 第18-21页 |
| 1.5.1 研究思路 | 第18-19页 |
| 1.5.2 本文研究意义 | 第19-21页 |
| 第2章 大肠埃希菌外膜蛋白OmpC原核载体构建与诱导表达条件优化 | 第21-39页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 试验材料 | 第21-24页 |
| 2.2.1 试验菌株及质粒 | 第21页 |
| 2.2.2 试验试剂及相关酶类 | 第21页 |
| 2.2.3 主要仪器设备 | 第21-22页 |
| 2.2.4 常用试剂配置 | 第22-24页 |
| 2.3 试验方法 | 第24-30页 |
| 2.3.1 引物设计 | 第24页 |
| 2.3.2 全基因组DNA提取 | 第24页 |
| 2.3.3 PCR扩增 | 第24-25页 |
| 2.3.4 PCR产物回收 | 第25页 |
| 2.3.5 PCR产物双酶切 | 第25-26页 |
| 2.3.6 质粒DNA提取 | 第26页 |
| 2.3.7 质粒双酶切 | 第26-27页 |
| 2.3.8 感受态细胞制备 | 第27页 |
| 2.3.9 检测感受态细胞DH5α 活力 | 第27页 |
| 2.3.10 PCR产物与载体连接 | 第27-28页 |
| 2.3.11 转化连接产物 | 第28页 |
| 2.3.12 诱导克隆菌表达 | 第28页 |
| 2.3.13 蛋白电泳 | 第28-29页 |
| 2.3.14 最佳菌种培养条件正交实验 | 第29页 |
| 2.3.15 最佳蛋白诱导表达条件正交实验 | 第29-30页 |
| 2.4 结果与分析 | 第30-37页 |
| 2.4.1 大肠埃希菌OmpC蛋白基因PCR扩增结果 | 第30页 |
| 2.4.2 pET-32a质粒载体的提取与检测 | 第30-32页 |
| 2.4.3 OmpC蛋白重组质粒的构建 | 第32页 |
| 2.4.4 重组蛋白表达检测 | 第32-33页 |
| 2.4.5 OmpC表达菌株最适培养条件的正交试验 | 第33-34页 |
| 2.4.6 OmpC表达菌诱导条件正交试验 | 第34-37页 |
| 2.5 讨论与小结 | 第37-39页 |
| 2.5.1 讨论 | 第37-38页 |
| 2.5.2 小结 | 第38-39页 |
| 第3章 大肠埃希菌外膜蛋白OmpC的免疫保护作用研究 | 第39-51页 |
| 3.1 引言 | 第39页 |
| 3.2 试验材料 | 第39-41页 |
| 3.2.1 试验菌株及动物 | 第39页 |
| 3.2.2 相关试剂及酶 | 第39页 |
| 3.2.3 主要试验设备 | 第39-40页 |
| 3.2.4 常用试剂配置 | 第40-41页 |
| 3.3 试验方法 | 第41-44页 |
| 3.3.1 OmpC蛋白纯化 | 第41-42页 |
| 3.3.2 蛋白冻干保存 | 第42页 |
| 3.3.3 蛋白质复性 | 第42页 |
| 3.3.4 小鼠一抗血清的制备 | 第42-43页 |
| 3.3.5 Western blotting效价测定 | 第43页 |
| 3.3.6 ELASA效价测定 | 第43-44页 |
| 3.3.7 攻毒小鼠进行免疫评价 | 第44页 |
| 3.4 结果与分析 | 第44-49页 |
| 3.4.1 重组蛋白的纯化 | 第44-46页 |
| 3.4.2 重组蛋白的复性 | 第46-47页 |
| 3.4.3 重组蛋白小鼠多克隆抗体的制备 | 第47-48页 |
| 3.4.4 OmpC蛋白的免疫保护作用 | 第48-49页 |
| 3.5 讨论与小结 | 第49-51页 |
| 3.5.1 讨论 | 第49页 |
| 3.5.2 小结 | 第49-51页 |
| 第4章 大肠埃希菌外膜蛋白OmpC的生物信息学分析及表位疫苗的重组设计 | 第51-63页 |
| 4.1 引言 | 第51页 |
| 4.2 试验材料与方法 | 第51-52页 |
| 4.2.1 试验材料 | 第51页 |
| 4.2.2 试验方法 | 第51-52页 |
| 4.3 结果与分析 | 第52-60页 |
| 4.3.1 OmpC蛋白进化关系分析 | 第52-54页 |
| 4.3.2 OmpC理化性质分析 | 第54-55页 |
| 4.3.3 OmpC蛋白信号肽及跨膜结构预测 | 第55页 |
| 4.3.4 OmpC蛋白二级、三级结构预测 | 第55-56页 |
| 4.3.5 OmpC蛋白B细胞表位预测 | 第56-57页 |
| 4.3.6 OmpC蛋白T细胞表位预测 | 第57-59页 |
| 4.3.7 串联表位的重组 | 第59-60页 |
| 4.4 讨论与小结 | 第60-63页 |
| 4.4.1 讨论 | 第60-61页 |
| 4.4.2 小结 | 第61-63页 |
| 结论 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-73页 |
| 附录 | 第73-75页 |
| 硕士期间学术成果 | 第75-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
