| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第13-29页 |
| 1.1 癌症概述 | 第13-17页 |
| 1.1.1 癌症 | 第13页 |
| 1.1.2 癌症的生物学特征 | 第13-15页 |
| 1.1.3 癌症的发生与治疗 | 第15-16页 |
| 1.1.4 癌细胞基因组的不稳定性 | 第16-17页 |
| 1.2 乳腺癌概述 | 第17-19页 |
| 1.2.1 乳腺癌的现状 | 第17-18页 |
| 1.2.2 乳腺癌的致病因素 | 第18页 |
| 1.2.3 乳腺癌的分型 | 第18-19页 |
| 1.2.4 乳腺癌的预防与治疗 | 第19页 |
| 1.3 miRNA概述 | 第19-23页 |
| 1.3.1 miRNA的概念 | 第20页 |
| 1.3.2 miRNA的加工与合成 | 第20-21页 |
| 1.3.3 miRNA的作用机制 | 第21-22页 |
| 1.3.4 miRNA与肿瘤的关系 | 第22-23页 |
| 1.4 他莫昔芬抗性概述 | 第23-29页 |
| 1.4.1 他莫昔芬简介 | 第24页 |
| 1.4.2 雌激素受体的作用机制 | 第24-26页 |
| 1.4.3 他莫昔芬抗性的分子机制 | 第26-29页 |
| 第二章 miR-1254在乳腺癌中表达下调 | 第29-37页 |
| 2.1 人10号染色体长臂miRNA基因不稳定性筛查 | 第29-31页 |
| 2.2 miR-1254主要由miR-1254-1基因座产生 | 第31-33页 |
| 2.3 miR-1254在乳腺癌临床样本中表达下调 | 第33-34页 |
| 2.4 miR-1254在乳腺癌细胞中表达下调 | 第34-35页 |
| 2.5 本章小结 | 第35-37页 |
| 第三章 miR-1254抑制乳腺癌细胞增殖 | 第37-49页 |
| 3.1 miR-1254抑制乳腺癌细胞增殖 | 第37-44页 |
| 3.2 miR-1254抑制乳腺癌细胞分裂 | 第44-45页 |
| 3.3 miR-1254促进乳腺癌细胞凋亡 | 第45-46页 |
| 3.4 本章小结 | 第46-49页 |
| 第四章 miR-1254抑制乳腺癌转移和干细胞样行为 | 第49-59页 |
| 4.1 miR-1254抑制乳腺癌细胞转移 | 第49-54页 |
| 4.2 miR-1254抑制乳腺癌细胞干细胞样行为 | 第54-58页 |
| 4.3 本章小结 | 第58-59页 |
| 第五章 miR-1254恢复乳腺癌他莫昔芬敏感性 | 第59-75页 |
| 5.1 抑制miR-1254可以降低ER+乳腺癌细胞雌激素依赖性 | 第59-62页 |
| 5.2 抑制miR-1254使ER+细胞产生他莫昔芬抗药性 | 第62-69页 |
| 5.3 过表达miR-1254可以恢复他莫昔芬敏感性 | 第69-72页 |
| 5.4 本章小结 | 第72-75页 |
| 第六章 miR-1254通过3’UTR直接调控的基因 | 第75-81页 |
| 6.1 生物信息学预测miR-1254靶点 | 第75-76页 |
| 6.2 双荧光素酶报告实验验证靶点 | 第76-78页 |
| 6.3 免疫印迹实验验证靶点 | 第78-79页 |
| 6.4 免疫组织化学实验验证靶点 | 第79-80页 |
| 6.5 本章小结 | 第80-81页 |
| 第七章 总结与讨论 | 第81-83页 |
| 第八章 材料与方法 | 第83-115页 |
| 8.1 乳腺癌临床冷冻组织中抽提miRNA | 第83-84页 |
| 8.1.1 乳腺癌病人临床冷冻组织样本 | 第83页 |
| 8.1.2 实验试剂及仪器 | 第83页 |
| 8.1.3 冷冻组织样本中miRNA的抽提 | 第83-84页 |
| 8.2 miRNA的反转录 | 第84页 |
| 8.2.1 实验试剂及仪器 | 第84页 |
| 8.2.2 反转录实验步骤 | 第84页 |
| 8.3 miRNA的quantitive Real-time PCR(qRT-PCR) | 第84-85页 |
| 8.3.1 实验试剂及仪器 | 第84页 |
| 8.3.2 qRT-PCR实验步骤 | 第84-85页 |
| 8.4 细胞内总RNA提取 | 第85-86页 |
| 8.4.1 实验试剂及仪器 | 第85页 |
| 8.4.2 TRIZOL法实验步骤 | 第85-86页 |
| 8.4.3 Ambion公司的miRNA抽提试剂盒抽取总RNA实验步骤 | 第86页 |
| 8.5 总RNA的RT-PCR | 第86-87页 |
| 8.5.1 实验试剂及仪器 | 第86-87页 |
| 8.5.2 RT-PCR实验步骤 | 第87页 |
| 8.6 总RNA的quantitive Real-time PCR(qRT-PCR) | 第87页 |
| 8.6.1 实验试剂及仪器 | 第87页 |
| 8.6.2 qRT-PCR实验步骤 | 第87页 |
| 8.7 双荧光报告实验 | 第87-92页 |
| 8.7.1 实验试剂及仪器 | 第88页 |
| 8.7.2 双荧光报告实验的原理 | 第88页 |
| 8.7.3 双荧光素酶报告载体的构建 | 第88-92页 |
| 8.8 载体的定点突变 | 第92页 |
| 8.8.1 实验试剂及仪器 | 第92页 |
| 8.8.2 实验步骤 | 第92页 |
| 8.9 shRNA载体构建 | 第92-93页 |
| 8.10 其它载体的构建 | 第93-94页 |
| 8.10.1 miR-1254的报告载体 | 第93页 |
| 8.10.2 miR-1254五个靶基因3'UTR表达载体 | 第93-94页 |
| 8.10.3 miR-1254 sponge | 第94页 |
| 8.11 质粒中抽 | 第94-95页 |
| 8.12 细胞培养 | 第95-96页 |
| 8.12.1 实验试剂及仪器 | 第96页 |
| 8.12.2 细胞日常培养 | 第96页 |
| 8.12.3 细胞的冻存与复苏 | 第96页 |
| 8.13 他莫昔芬抗性细胞系的构建 | 第96-97页 |
| 8.14 细胞的种板和转染 | 第97-98页 |
| 8.14.1 实验试剂及仪器 | 第97页 |
| 8.14.2 细胞的种板 | 第97页 |
| 8.14.3 细胞的转染步骤 | 第97-98页 |
| 8.15 MTT(细胞活力测定法) | 第98-99页 |
| 8.15.1 实验原理 | 第98页 |
| 8.15.2 实验试剂及仪器 | 第98页 |
| 8.15.3 实验步骤 | 第98-99页 |
| 8.16 软琼脂克隆形成实验(Soft Agar) | 第99-100页 |
| 8.16.1 实验试剂及仪器 | 第99页 |
| 8.16.2 实验步骤 | 第99-100页 |
| 8.17 细胞二维(2D)基质胶(matrigel)培养 | 第100-101页 |
| 8.17.1 实验原理 | 第100页 |
| 8.17.2 实验试剂及仪器 | 第100页 |
| 8.17.3 实验步骤 | 第100-101页 |
| 8.18 细胞克隆形成实验 | 第101页 |
| 8.18.1 实验原理 | 第101页 |
| 8.18.2 实验试剂及仪器 | 第101页 |
| 8.18.3 实验步骤 | 第101页 |
| 8.19 细胞单层培养克隆形成实验(monolayer culture) | 第101-102页 |
| 8.19.1 实验原理 | 第101-102页 |
| 8.19.2 实验试剂及仪器 | 第102页 |
| 8.19.3 实验步骤 | 第102页 |
| 8.20 细胞球囊悬浮培养(mammospheric growth) | 第102-103页 |
| 8.20.1 实验原理 | 第102页 |
| 8.20.2 实验试剂及仪器 | 第102-103页 |
| 8.20.3 实验步骤 | 第103页 |
| 8.21 细胞迁移(Transwell Assay-Migration)实验 | 第103-104页 |
| 8.21.1 实验原理 | 第103页 |
| 8.21.2 实验试剂及仪器 | 第103页 |
| 8.21.3 实验步骤 | 第103-104页 |
| 8.22 流式细胞术(Flow Cytometry,FCM) | 第104-106页 |
| 8.22.1 实验原理 | 第104-105页 |
| 8.22.2 实验试剂及仪器 | 第105页 |
| 8.22.3 实验步骤 | 第105-106页 |
| 8.23 蛋白印记法(western blot) | 第106-109页 |
| 8.23.1 实验试剂及仪器 | 第106页 |
| 8.23.2 实验步骤 | 第106-109页 |
| 8.24 稳转细胞系的构建 | 第109-110页 |
| 8.24.1 实验试剂及仪器 | 第110页 |
| 8.24.2 实验步骤 | 第110页 |
| 8.25 裸鼠体内荷瘤实验 | 第110-112页 |
| 8.25.1 实验试剂及仪器 | 第110页 |
| 8.25.2 实验步骤 | 第110-112页 |
| 8.26 免疫组织化学工HC | 第112-113页 |
| 8.26.1 实验试剂及仪器 | 第112页 |
| 8.26.2 实验步骤 | 第112-113页 |
| 8.27 苏木精—伊红染色法(HE染色) | 第113页 |
| 8.28 脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术(TUNEL) | 第113-115页 |
| 8.28.1 实验试剂及仪器 | 第113-114页 |
| 8.28.2 实验步骤 | 第114-115页 |
| 参考文献 | 第115-123页 |
| 附录 引物序列及抗体信息 | 第123-129页 |
| 致谢 | 第129-131页 |
| 在读期间发表的论文与取得的研究成果 | 第131页 |
