| 中文摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 英文缩略词表 | 第13-14页 |
| 引言 | 第14-15页 |
| 第一篇 文献综述 | 第15-33页 |
| 第一章 牛病毒性腹泻病毒的研究进展 | 第15-21页 |
| 1 BVDV生物学特性 | 第15-16页 |
| 1.1 BVDV概述 | 第15页 |
| 1.2 病原类型 | 第15-16页 |
| 2 BVDV基因结构特征 | 第16-18页 |
| 2.1 BVDV基因组结构 | 第16页 |
| 2.2 BVDV的非翻译区 | 第16页 |
| 2.3 BVDV的开放阅读框架 | 第16-17页 |
| 2.4 BVDV的蛋白结构 | 第17-18页 |
| 3 BVDV的致病机理 | 第18-20页 |
| 3.1 NCP向CP型转化的研究 | 第18-19页 |
| 3.2 BVDV侵染细胞机制 | 第19页 |
| 3.3 BVDV的持续感染 | 第19-20页 |
| 4 小结 | 第20-21页 |
| 第二章 miRNA与高通量测序 | 第21-33页 |
| 1 miRNA概述 | 第21-25页 |
| 1.1 miRNA的发现 | 第21页 |
| 1.2 miRNA的形成 | 第21-22页 |
| 1.3 miRNA的特点 | 第22页 |
| 1.4 miRNA的生物学功能 | 第22-23页 |
| 1.5 影响miRNA功能的因素 | 第23-24页 |
| 1.6 miRNA的检测方法 | 第24-25页 |
| 2 miRNA调控机制的研究 | 第25-29页 |
| 2.1 miRNA调控细胞凋亡的研究 | 第25-26页 |
| 2.2 miRNA调控细胞自噬的研究 | 第26-27页 |
| 2.3 miRNA参与免疫系统调节的研究 | 第27-28页 |
| 2.4 宿主miRNA与病毒感染 | 第28-29页 |
| 3 测序技术 | 第29-30页 |
| 3.1 测序技术的概述 | 第29页 |
| 3.2 测序技术的的发展 | 第29-30页 |
| 4 高通量测序技术与miRNA | 第30-32页 |
| 4.1 高通量测序技术对miRNA检测的原理和步骤 | 第30-31页 |
| 4.2 生物信息学分析 | 第31页 |
| 4.3 高通量测序在miRNA中的应用 | 第31-32页 |
| 5 小结 | 第32-33页 |
| 第二篇 试验研究 | 第33-86页 |
| 试验一 小RNA文库的构建及miRNA的筛选与鉴定 | 第33-57页 |
| 1 材料与方法 | 第34-41页 |
| 1.1 材料 | 第34页 |
| 1.2 方法 | 第34-41页 |
| 2 结果 | 第41-54页 |
| 2.1 cpBVDV NADL感染MDBK细胞的形态学观察 | 第41-42页 |
| 2.2 miRNAs高通量测序结果 | 第42-44页 |
| 2.3 已知miRNAs的分析 | 第44-48页 |
| 2.4 实时定量PCR验证 | 第48页 |
| 2.5 新miRNAs的预测 | 第48-49页 |
| 2.6 已知差异表达miRNAs靶基因的预测 | 第49-50页 |
| 2.7 已知miRNAs靶基因的GO和KEGG通路分析 | 第50页 |
| 2.8 mRNAs高通量测序结果 | 第50-51页 |
| 2.9 差异表达基因的分析 | 第51-53页 |
| 2.10 基因的GO和KEGG通路分析 | 第53页 |
| 2.11 miR-2904 对cp BVDV NADL复制水平的影响检测 | 第53页 |
| 2.12 预测与miR-2904 研究相关的靶基因 | 第53-54页 |
| 3 讨论 | 第54-57页 |
| 3.1 小分子RNA测序 | 第54-55页 |
| 3.2 转录组测序 | 第55-57页 |
| 试验二 miR-2904 影响细胞凋亡的分子机制研究 | 第57-68页 |
| 1 材料与方法 | 第58-62页 |
| 1.1 材料 | 第58页 |
| 1.2 方法 | 第58-62页 |
| 2 结果 | 第62-66页 |
| 2.1 MDBK细胞的形态学观察 | 第62-63页 |
| 2.2 Hochest染色分析细胞凋亡 | 第63页 |
| 2.3 miR-2904 mimics显著性抑制MDBK细胞凋亡 | 第63-64页 |
| 2.4 靶基因的预测 | 第64页 |
| 2.5 双荧光素酶报告基因载体的构建 | 第64-65页 |
| 2.6 双荧光素酶报告系统分析 | 第65页 |
| 2.7 caspase-9 转录水平的检测 | 第65-66页 |
| 2.8 Western blot检测caspase-9 蛋白水平 | 第66页 |
| 3 讨论 | 第66-68页 |
| 3.1 miRNA与凋亡 | 第66-67页 |
| 3.2 miR-2904 在转录水平调控凋亡影响病毒复制 | 第67-68页 |
| 试验三 miR-2904 影响cpBVDV NADL感染诱导的细胞自噬 | 第68-79页 |
| 1 材料与方法 | 第69-73页 |
| 1.1 材料 | 第69页 |
| 1.2 方法 | 第69-73页 |
| 2 结果 | 第73-77页 |
| 2.1 透射电镜观察自噬体和自噬溶酶体的形成 | 第73页 |
| 2.2 GFP-LC3载体的构建 | 第73-74页 |
| 2.3 GFP-LC3转染MDBK细胞情况 | 第74页 |
| 2.4 激光共聚焦显微镜观察GFP-LC3 dots的形成 | 第74-75页 |
| 2.5 miR-2904 靶向自噬相关基因ATG13 | 第75页 |
| 2.6 双荧光素酶报告基因载体的构建 | 第75页 |
| 2.7 双荧光素酶报告系统分析 | 第75-76页 |
| 2.8 自噬相关蛋白ATG13 mRNA转录水平检测 | 第76页 |
| 2.9 自噬相关蛋白ATG13蛋白的表达水平检测 | 第76-77页 |
| 3 讨论 | 第77-79页 |
| 3.1 病毒与自噬 | 第77页 |
| 3.2 miRNA调控细胞自噬影响BVDV的复制 | 第77-79页 |
| 试验四 miR-2904 对BVDV感染诱导细胞免疫的初步研究 | 第79-86页 |
| 1 材料与方法 | 第80-82页 |
| 1.1 材料 | 第80页 |
| 1.2 方法 | 第80-82页 |
| 2 结果 | 第82-84页 |
| 2.1 免疫相关因子转录水平检测 | 第82页 |
| 2.2 miR-2904 靶向免疫相关基因IL6R | 第82-83页 |
| 2.3 双荧光素酶报告基因载体的构建 | 第83页 |
| 2.4 双荧光素酶报告系统分析 | 第83-84页 |
| 2.5 自噬相关蛋白IL6R mRNA转录水平检测 | 第84页 |
| 3 讨论 | 第84-86页 |
| 3.1 miRNA与抗病毒免疫 | 第84-85页 |
| 3.2 miRNA与病毒复制 | 第85-86页 |
| 第三篇 全文总结 | 第86-87页 |
| 创新点 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-112页 |
| 致谢 | 第112-113页 |
| 作者简介 | 第113-114页 |
| 石河子大学博士研究生学位论文导师评阅表 | 第114页 |
