| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 缩略词表 | 第8-9页 |
| 1 前言 | 第9-25页 |
| 1.1 多室油菜的研究进展 | 第9-13页 |
| 1.1.1 多室油菜的种类及表型特征 | 第9-10页 |
| 1.1.2 多室油菜的遗传及其基因定位 | 第10-11页 |
| 1.1.3 模式植物拟南芥中多室性状的分子调控机理 | 第11-13页 |
| 1.2 基因组编辑技术的研究进展 | 第13-24页 |
| 1.2.1 主要基因编辑技术简介 | 第13-14页 |
| 1.2.2 细菌中CRISPR/Cas免疫系统的简介 | 第14-16页 |
| 1.2.2.1 CRISPR/Cas基因座的结构 | 第14-15页 |
| 1.2.2.2 CRISPR/Cas系统的分类 | 第15页 |
| 1.2.2.3 CRISPR/Cas免疫系统的工作原理 | 第15-16页 |
| 1.2.3 人工合成的CRISPR/Cas9系统 | 第16-19页 |
| 1.2.3.1 Cas9蛋白 | 第16页 |
| 1.2.3.2 导向RNA | 第16-17页 |
| 1.2.3.3 PAM元件 | 第17-18页 |
| 1.2.3.4 CRISPR/Cas9的工作原理 | 第18-19页 |
| 1.2.4 CRISPR/Cas9与其他基因编辑技术的比较 | 第19-20页 |
| 1.2.5 CRISPR/Cas9编辑的检测方法 | 第20-22页 |
| 1.2.6 CRISPR/Cas9基因编辑的类型和突变效率 | 第22-23页 |
| 1.2.7 CRISPR/Cas9基因编辑技术在植物中的应用 | 第23-24页 |
| 1.3 本研究的目的与意义 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-26页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第25页 |
| 2.1.2 转化载体 | 第25页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第25页 |
| 2.1.4 主要试剂的配方 | 第25-26页 |
| 2.1.4.1 油菜遗传转化的培养基 | 第25-26页 |
| 2.1.4.2 DNA提取相关试剂 | 第26页 |
| 2.1.4.3 非变性PAGE胶相关试剂 | 第26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-33页 |
| 2.2.1 多靶点CRISPR/Cas9载体的构建 | 第26-28页 |
| 2.2.2 农杆菌介导的遗传转化与阳性鉴定 | 第28-29页 |
| 2.2.2.1 农杆菌介导的油菜下胚轴遗传转化 | 第28页 |
| 2.2.2.2 转基因植株的阳性鉴定 | 第28-29页 |
| 2.2.3 转基因阳性植株的编辑检测和测序 | 第29-32页 |
| 2.2.3.1 基于PAGE的编辑检测 | 第29-30页 |
| 2.2.3.2 PCR产物测序 | 第30-31页 |
| 2.2.3.3 PCR产物克隆测序 | 第31-32页 |
| 2.2.4 转基因油菜的种植 | 第32页 |
| 2.2.5 多室性状考察 | 第32-33页 |
| 3 实验结果 | 第33-44页 |
| 3.1 多室候选基因结构分析 | 第33-34页 |
| 3.2 多靶点CRISPR/Cas9载体的构建 | 第34-35页 |
| 3.3 CRISPR/Cas9转基因植株的阳性鉴定结果 | 第35-36页 |
| 3.4 甘蓝型油菜中CRISPR/Cas9的编辑效率 | 第36-38页 |
| 3.5 突变的类型 | 第38-40页 |
| 3.6 突变的遗传 | 第40-41页 |
| 3.7 突变表型 | 第41-44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| 4.1 多靶点CRISPR-Cas9系统在油菜中的运用 | 第44页 |
| 4.2 多靶点CRISPR-Cas9系统在甘蓝型油菜中的突变特点 | 第44-45页 |
| 4.3 甘蓝型油菜的多室基因 | 第45页 |
| 4.4 存在问题 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-53页 |
| 致谢 | 第53页 |
