| 中英文缩略表 | 第10-12页 |
| 摘要 | 第12-14页 |
| ABSTRACT | 第14-15页 |
| 第一章 绪论 胃癌治疗药物研究进展 | 第16-38页 |
| 1.1 概述 | 第16页 |
| 1.2 胃癌病因研究 | 第16页 |
| 1.3 胃癌治疗手段 | 第16-30页 |
| 1.3.1 细胞毒类药物 | 第17页 |
| 1.3.2 靶向药物治疗 | 第17-24页 |
| 1.3.2.1 蛋白激酶抑制剂 | 第18-22页 |
| 1.3.2.2 肿瘤干细胞通路抑制剂 | 第22-23页 |
| 1.3.2.3 免疫检验点抑制剂 | 第23-24页 |
| 1.3.3 糖酵解抑制剂 | 第24-30页 |
| 1.3.3.1 肿瘤发生发展中获得的标志性特征 | 第24-26页 |
| 1.3.3.2 糖酵解通路与肿瘤药物研发 | 第26-29页 |
| 1.3.3.3 糖酵解抑制剂与药物的联合用药 | 第29-30页 |
| 1.4 本论文主要研究工作 | 第30页 |
| 1.5 参考文献 | 第30-38页 |
| 第二章 PFK15对胃癌细胞的直接抗肿瘤作用及机制研究 | 第38-73页 |
| 2.1 前言 | 第38-39页 |
| 2.2 实验材料和仪器 | 第39-44页 |
| 2.2.1 化学试剂 | 第39-41页 |
| 2.2.2 实验动物 | 第41-42页 |
| 2.2.3 主要溶液配制方法 | 第42-43页 |
| 2.2.4 仪器与材料 | 第43-44页 |
| 2.3 实验方法 | 第44-53页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第44页 |
| 2.3.2 细胞增殖试验 | 第44页 |
| 2.3.3 F2,6P_2生成和葡萄糖摄取试验 | 第44-45页 |
| 2.3.4 细胞周期检测试验 | 第45页 |
| 2.3.5 细胞凋亡检测试验 | 第45-46页 |
| 2.3.5.1 Hoechst荧光染色观察细胞形态变化 | 第45页 |
| 2.3.5.2 双染法细胞凋亡检测试验 | 第45-46页 |
| 2.3.6 细胞运动能力检测 | 第46-47页 |
| 2.3.6.1 细胞骨架F-actin变化检测 | 第46页 |
| 2.3.6.2 细胞迁移检测 | 第46-47页 |
| 2.3.6.3 细胞侵袭检测 | 第47页 |
| 2.3.7 western blot法检测相关蛋白表达变化 | 第47-50页 |
| 2.3.7.1 蛋白样品制备 | 第47-48页 |
| 2.3.7.2 蛋白定量 | 第48页 |
| 2.3.7.3 SDS-PAGE蛋白分析 | 第48-50页 |
| 2.3.8 体内胃癌移植瘤模型试验 | 第50-51页 |
| 2.3.9 免疫组化分析 | 第51-53页 |
| 2.3.9.1 瘤组织取材,包埋及切片 | 第51-52页 |
| 2.3.9.2 免疫组织化学分析 | 第52-53页 |
| 2.3.10 统计与分析 | 第53页 |
| 2.4 实验结果 | 第53-66页 |
| 2.4.1 PFK15对细胞增殖能力的影响 | 第53-54页 |
| 2.4.2 PFK15对细胞F2,6P_2生成和糖摄取能力的影响 | 第54-55页 |
| 2.4.3 PFK15对细胞周期的影响 | 第55-57页 |
| 2.4.4 PFK15对细胞周期相关蛋白的影响 | 第57-58页 |
| 2.4.5 PFK15对细胞凋亡的影响 | 第58-61页 |
| 2.4.5.1 Hoechst荧光染色观察细胞形态变化 | 第58页 |
| 2.4.5.2 Annexin V-FITC双染法检测细胞凋亡 | 第58-60页 |
| 2.4.5.3 PFK15对凋亡相关蛋白的影响 | 第60-61页 |
| 2.4.6 PFK15对细胞运动能力的影响 | 第61-64页 |
| 2.4.6.1 PFK15对胃癌细胞骨架的影响 | 第61-62页 |
| 2.4.6.2 PFK15对胃癌细胞迁移的影响 | 第62-63页 |
| 2.4.6.3 PFK15对MKN45和AGS细胞侵袭的影响 | 第63-64页 |
| 2.4.7 PFK15对人胃癌细胞裸小鼠移植瘤模型的影响 | 第64-65页 |
| 2.4.8 免疫组化分析PFK15对肿瘤细胞周期和凋亡相关蛋白的影响 | 第65-66页 |
| 2.5 讨论 | 第66-69页 |
| 2.6 本章小结 | 第69页 |
| 2.7 参考文献 | 第69-73页 |
| 第三章 PFK15对胃癌肿瘤血管生成的影响 | 第73-101页 |
| 3.1 前言 | 第73页 |
| 3.2 试验材料和仪器 | 第73-77页 |
| 3.2.1 主要化学试剂 | 第73-75页 |
| 3.2.2 试验动物 | 第75-76页 |
| 3.2.3 主要溶液配置方法 | 第76页 |
| 3.2.4 仪器与材料 | 第76-77页 |
| 3.3 试验方法 | 第77-82页 |
| 3.3.1 细胞培养 | 第77-78页 |
| 3.3.2 细胞增殖试验 | 第78页 |
| 3.3.3 F2,6P_2生成和葡萄糖摄取试验 | 第78页 |
| 3.3.4 内皮细胞微管样结构形成试验 | 第78-79页 |
| 3.3.5 体外内皮细胞球状体出芽试验 | 第79页 |
| 3.3.5.1 内皮细胞球状体EC spheroid制备 | 第79页 |
| 3.3.5.2 体外血管生成试验 | 第79页 |
| 3.3.6 Matrigel Plug试验 | 第79-80页 |
| 3.3.6.1 Matrigel Plug模型建立 | 第80页 |
| 3.3.6.2 TMB法测定相对血红蛋白浓度 | 第80页 |
| 3.3.7 western blot法检测血管新生相关蛋白表达变化 | 第80-81页 |
| 3.3.7.1 细胞来源蛋白检测方法 | 第80页 |
| 3.3.7.2 组织来源蛋白检测方法 | 第80-81页 |
| 3.3.8 人胃癌移植瘤模型 | 第81-82页 |
| 3.3.9 免疫组化分析 | 第82页 |
| 3.3.10 统计与分析 | 第82页 |
| 3.4 试验结果 | 第82-94页 |
| 3.4.1 PFKFB3在组织和细胞中的特异性表达 | 第82-83页 |
| 3.4.2 PFK15对EA.hy926细胞F2,6P_2生成和糖摄取能力的影响 | 第83-84页 |
| 3.4.3 PFK15和sorafenib联合用药对EA.hy926细胞增殖能力的影响 | 第84-85页 |
| 3.4.4 PFK15和sorafenib联合用药对EA.hy926细胞管状结构形成能力的影响 | 第85-86页 |
| 3.4.5 三维细胞培养技术检测药物对内皮细胞球状体出芽的影响 | 第86-88页 |
| 3.4.5.1 内皮细胞球状体的制作与培养 | 第86-87页 |
| 3.4.5.2 PFK15和sorafenib联合用药对EA.hy926球状体(spheroid)出芽的影响 | 第87-88页 |
| 3.4.6 PFK15和sorafenib联合用药对Matrigel Plug中血管新生的影响 | 第88-89页 |
| 3.4.7 PFK15和sorafenib联合用药对EA.hy926中磷酸化VEGFR2蛋白表达的影响 | 第89-90页 |
| 3.4.8 PFK15和sorafenib联合用药对人胃癌裸小鼠移植瘤模型的影响 | 第90-93页 |
| 3.4.9 PFK15和sorafenib联合用药对人胃癌裸小鼠移植瘤中血管新生的影响 | 第93-94页 |
| 3.5 讨论 | 第94-96页 |
| 3.6 本章小结 | 第96页 |
| 3.7 参考文献 | 第96-101页 |
| 第四章 结论 | 第101-103页 |
| 本研究的创新点 | 第102-103页 |
| 作者简历及发表文章 | 第103-105页 |
| 致谢 | 第105-106页 |
| 附件 | 第106-120页 |
