| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9页 |
| 缩略词表 | 第10-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-22页 |
| 1.1 核盘菌的研究进展 | 第12-14页 |
| 1.1.1 核盘菌的危害 | 第12页 |
| 1.1.2 核盘菌的防治措施 | 第12-14页 |
| 1.2 盾壳霉的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.2.1 盾壳霉的的生物学特性 | 第14页 |
| 1.2.2 盾壳霉的生防机制 | 第14-15页 |
| 1.2.3 盾壳霉的基因功能研究 | 第15页 |
| 1.3 调控黑色素生物合成的转录因子MR的研究进展 | 第15-21页 |
| 1.3.1 黑色素的分类及生物学功能 | 第15-16页 |
| 1.3.2 DHN黑色素的合成途径及研究进展 | 第16-17页 |
| 1.3.3 转录因子MR的研究进展 | 第17-21页 |
| 1.4 研究目的及意义 | 第21-22页 |
| 第二章 基因CmMR1敲除和互补转化子的获得与验证 | 第22-44页 |
| 2.1 试验材料 | 第22-25页 |
| 2.1.1 菌株 | 第22页 |
| 2.1.2 载体 | 第22-23页 |
| 2.1.3 培养基 | 第23页 |
| 2.1.4 试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.5 生物酶 | 第24页 |
| 2.1.6 主要仪器 | 第24-25页 |
| 2.2 方法 | 第25-33页 |
| 2.2.1 盾壳霉基因CmMR1的获得 | 第25-26页 |
| 2.2.1.1 DNA的提取 | 第25页 |
| 2.2.1.2 hiTAIL-PCR克隆基因 | 第25-26页 |
| 2.2.2 盾壳霉基因CmMR1表达动态分析 | 第26-27页 |
| 2.2.2.1 总RNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.2.2 cDNA的合成 | 第27页 |
| 2.2.3 盾壳霉基因CmMR1敲除转化子的获得与验证 | 第27-31页 |
| 2.2.3.1 同源重组的原理 | 第27-28页 |
| 2.2.3.2 PCR扩增获得目标基因的上下游序列和HYG片段 | 第28页 |
| 2.2.3.3 融合片段的获得 | 第28-29页 |
| 2.2.3.4 UHY和YGD测序验证 | 第29页 |
| 2.2.3.5 盾壳霉ZS-1 原生质体的制备 | 第29-30页 |
| 2.2.3.6 PEG介导的原生质体转化 | 第30页 |
| 2.2.3.7 CmMR1敲除转化子的PCR验证 | 第30页 |
| 2.2.3.8 CmMR1敲除转化子的RT-PCR验证 | 第30-31页 |
| 2.2.4 盾壳霉基因CmMR1互补转化子的获得与验证 | 第31-32页 |
| 2.2.4.1 CmMR1互补载体的构建 | 第31页 |
| 2.2.4.2 农杆菌介导的盾壳霉转化 | 第31-32页 |
| 2.2.4.3 CmMR1互补转化子的PCR验证 | 第32页 |
| 2.2.4.4 CmMR1互补转化子的RT-PCR验证 | 第32页 |
| 2.2.5 盾壳霉菌株中黑色素合成酶基因的表达量 | 第32-33页 |
| 2.3 结果与分析 | 第33-42页 |
| 2.3.1 T-DNA插入突变体ZS-1N24363的生物学表型 | 第33-34页 |
| 2.3.2 ZS-1TN24363 T-DNA插入破坏基因的克隆和序列分析 | 第34-36页 |
| 2.3.3 CmMR1基因表达动态分析 | 第36-37页 |
| 2.3.4 CmMR1敲除转化子的获得与验证 | 第37-40页 |
| 2.3.4.1 CmMR1上下游片段以及HYG片段的获得 | 第37-38页 |
| 2.3.4.2 同源重组片段UHY和YGD的获得 | 第38页 |
| 2.3.4.3 CmMR1敲除转化子的PCR验证 | 第38-39页 |
| 2.3.4.4 CmMR1敲除转化子的RT-PCR验证 | 第39-40页 |
| 2.3.5 盾壳霉基因CmMR1互补转化子的获得与验证 | 第40-41页 |
| 2.3.5.1 CmMR1互补转化子的PCR验证 | 第40-41页 |
| 2.3.5.2 CmMR1互补转化子的RT-PCR验证 | 第41页 |
| 2.3.6 盾壳霉菌株中黑色素合成酶基因的表达量 | 第41-42页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 盾壳霉基因CmMR1的功能研究 | 第44-60页 |
| 3.1 试验材料 | 第44页 |
| 3.1.1 菌株 | 第44页 |
| 3.1.2 培养基 | 第44页 |
| 3.1.3 试剂 | 第44页 |
| 3.2 方法 | 第44-48页 |
| 3.2.1 盾壳霉菌株的菌落形态特征观察 | 第44-45页 |
| 3.2.2 盾壳霉菌株的菌丝尖端观察 | 第45页 |
| 3.2.3 盾壳霉菌株的生长速度测定 | 第45页 |
| 3.2.4 盾壳霉菌株的产孢量测定 | 第45页 |
| 3.2.5 盾壳霉菌株的生物学产量测定 | 第45页 |
| 3.2.6 盾壳霉菌株寄生核盘菌能力的检测 | 第45-47页 |
| 3.2.6.1 对峙培养 | 第45-46页 |
| 3.2.6.2 菌核寄生 | 第46-47页 |
| 3.2.7 NBT染色检测活性氧含量 | 第47页 |
| 3.2.8 盾壳霉菌株的抗紫外线能力测定 | 第47-48页 |
| 3.2.9 盾壳霉菌株对高渗的耐受性测定 | 第48页 |
| 3.3 结果与分析 | 第48-58页 |
| 3.3.1 CmMR1转化子的菌落形态 | 第48页 |
| 3.3.2 CmMR1转化子的菌丝尖端形态 | 第48-49页 |
| 3.3.3 CmMR1转化子的生长速率 | 第49-50页 |
| 3.3.4 CmMR1转化子的产孢量 | 第50-51页 |
| 3.3.5 CmMR1转化子的生物学产量 | 第51-52页 |
| 3.3.6 CmMR1转化子寄生核盘菌能力的检测 | 第52-55页 |
| 3.3.6.1 对峙培养 | 第52-54页 |
| 3.3.6.2 菌核寄生 | 第54-55页 |
| 3.3.7 CmMR1转化子中的ROS含量 | 第55-56页 |
| 3.3.8 CmMR1转化子的抗紫外线能力测定 | 第56-57页 |
| 3.3.9 CmMR1转化子对高渗的耐受性 | 第57-58页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第58-60页 |
| 第四章 总结与展望 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-73页 |
| 附录一 | 第73-74页 |
| 附录二 | 第74-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
