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淡色库蚊氯菊酯抗性相关actin基因和P450基因全长cDNA克隆及序列分析

摘要第1-6页
ABSTRACT第6-11页
第一章 文献综述第11-23页
   ·蚊子的危害及其治理第11-13页
   ·昆虫对化学杀虫剂的抗性机制第13-15页
     ·表皮穿透性的降低第13页
     ·解毒酶活力的增强第13-14页
     ·神经系统敏感性的下降第14-15页
   ·功能基因研究方法第15-17页
     ·抑制性差减杂交技术第15页
     ·cDNA芯片技术第15页
     ·表达序列标签第15-16页
     ·快速扩增cDNA末端技术第16页
     ·原核表达技术第16-17页
     ·RNA干扰技术第17页
   ·蚊虫杀虫剂抗性基因研究进展第17-21页
     ·细胞色素 P450 家族的研究第17-18页
     ·乙酰胆碱酯酶基因的研究第18-19页
     ·全基因族筛选第19页
     ·胰蛋白酶和糜蛋白酶基因(丝氨酸蛋白酶家族)的研究第19-20页
     ·视蛋白基因的研究第20页
     ·肌球蛋白轻链 2 基因的研究第20-21页
     ·糖原分支酶基因的研究第21页
     ·库蚊核糖体蛋白基因克隆及初步功能的研究第21页
     ·淡色库蚊β肌动蛋白基因克隆与序列分析第21页
   ·本研究的意义第21-23页
     ·淡色库蚊抗氯菊酯的差异基因的 cDNA 全长克隆第22页
     ·抗性基因的原核表达第22页
     ·生物信息学分析第22-23页
第二章 淡色库蚊肌动蛋白基因全长 cDNA 的克隆、序列分析及原核表达第23-42页
   ·材料第24-25页
     ·试验蚊第24页
     ·主要试剂第24页
     ·主要仪器设备第24页
     ·引物第24-25页
   ·方法第25-29页
     ·总 RNA的提取第25页
     ·cDNA第一链的合成第25页
     ·PCR反应第25-26页
     ·PCR产物的纯化第26页
     ·PCR产物的 T/A 克隆第26-27页
     ·阳性菌落的鉴定及扩大培养第27页
     ·阳性质粒的鉴定及测序第27页
     ·RACE 3’末端扩增第27-28页
     ·RACE 5’末端扩增第28页
     ·RACE 产物的克隆、鉴定和测序第28页
     ·生物信息学分析第28页
     ·重组载体的构建第28-29页
     ·菌落 PCR、质粒PCR及双酶切鉴定第29页
     ·多试管诱导表达及SDS-PAGE蛋白电泳检测第29页
   ·结果与分析第29-40页
     ·淡色库蚊总RNA的提取及电泳检测第29-30页
     ·淡色库蚊actin基因全长的克隆第30-31页
     ·测序结果与已知致倦库蚊 EST 序列的比对第31页
     ·Actin基因的全长核苷酸序列及编码氨基酸序列第31-33页
     ·淡色库蚊actin基因的生物信息学分析第33-39页
     ·淡色库蚊 actin 基因原核表达第39-40页
   ·讨论第40-42页
第三章 淡色库蚊细胞色素P450基因全长cDNA的克隆及生物信息学分析第42-57页
   ·材料第42-43页
     ·试验蚊第42-43页
     ·主要试剂第43页
     ·主要仪器设备第43页
     ·引物第43页
   ·方法第43-44页
     ·总 RNA的提取第43页
     ·cDNA第一链的合成第43页
     ·RACE 3’末端扩增第43-44页
     ·RACE 5’末端扩增第44页
     ·PCR产物的纯化第44页
     ·RACE产物的克隆、鉴定和测序第44页
     ·生物信息学分析第44页
   ·结果与分析第44-55页
     ·淡色库蚊总RNA的提取及电泳检测第44-45页
     ·淡色库蚊CYP450基因全长的克隆第45-46页
     ·测序结果与已知致倦库蚊 EST 序列的比对第46页
     ·CYP450基因的全长核苷酸序列及编码氨基酸序列第46-48页
     ·淡色库蚊 CYP450基因的生物信息学分析第48-55页
   ·讨论第55-57页
第四章 结论第57-59页
   ·肌动蛋白基因全长cDNA的获得第57页
   ·细胞色素P450基因全长cDNA的获得第57-59页
第五章 展望第59-60页
参考文献第60-66页
致谢第66-67页
作者简介第67页

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