| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 1 前言 | 第10-18页 |
| 1.1 香蕉枯萎病 | 第10-12页 |
| 1.1.1 香蕉枯萎病致病菌 | 第10页 |
| 1.1.2 香蕉枯萎病菌的致病机理 | 第10-11页 |
| 1.1.3 抗病机理研究 | 第11-12页 |
| 1.1.4 抗性基因研究进展 | 第12页 |
| 1.2 植物表观遗传学研究进展 | 第12-17页 |
| 1.2.1 植物DNA甲基化 | 第13页 |
| 1.2.2 植物非生物胁迫与DNA甲基化 | 第13-15页 |
| 1.2.3 植物生物胁迫与DNA甲基化 | 第15-16页 |
| 1.2.4 DNA甲基化研究方法 | 第16-17页 |
| 1.3 本研究目的、意义与技术路线 | 第17-18页 |
| 1.3.1 本研究的目的与意义 | 第17页 |
| 1.3.2 本研究的技术路线 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第18页 |
| 2.2 仪器与试剂 | 第18-20页 |
| 2.2.1 主要仪器 | 第18页 |
| 2.2.2 培养基及试剂 | 第18-20页 |
| 2.3 香蕉枯萎病病菌离体叶片接种 | 第20-21页 |
| 2.3.1 香蕉枯萎病尖孢镰刀菌菌株培养 | 第20页 |
| 2.3.2 供试巴西蕉品种培养,接种鉴定和取样 | 第20-21页 |
| 2.4 香蕉叶片的总DNA及部RNA提取 | 第21-22页 |
| 2.4.1 准备试验 | 第21页 |
| 2.4.2 香蕉叶片总DNA提取方法 | 第21页 |
| 2.4.3 香蕉叶片总RNA提取方法 | 第21-22页 |
| 2.5 香蕉叶片总DNA甲基化敏感扩增多态性分析(MSAP) | 第22-26页 |
| 2.5.1 接头及引物合成 | 第22页 |
| 2.5.2 香蕉叶片基因组DNA双酶切反应 | 第22-23页 |
| 2.5.3 人工接头连接 | 第23-24页 |
| 2.5.4 预扩增 | 第24页 |
| 2.5.5 选择性扩增 | 第24-25页 |
| 2.5.6 聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE) | 第25-26页 |
| 2.6 香蕉枯萎病MSAP差异片段的回收与克隆 | 第26-27页 |
| 2.6.1 差异片段的回收 | 第26页 |
| 2.6.2 甲基化差异片段的克隆 | 第26-27页 |
| 2.7 差异片段半定量PCR分析 | 第27-28页 |
| 2.7.1 cDNA第一条链合成 | 第27页 |
| 2.7.2 半定量PCR引物设计 | 第27-28页 |
| 2.7.3 半定量RT-PCR反应体系及程序 | 第28页 |
| 2.8 热不对称PCR(TAIL-PCR)对差异片段侧翼扩增 | 第28-30页 |
| 2.8.1 TAIL-PCR引物设计 | 第28页 |
| 2.8.2 TAIL-PCR反应体系及程序 | 第28-29页 |
| 2.8.3 扩增片段测序与分析 | 第29-30页 |
| 2.9 甲基化特异位点PCR分析(Mehtylation-Specific PCR-MSP) | 第30-31页 |
| 2.9.1 香蕉叶片基因组DNA的Sodium bisulfite变性处理 | 第30页 |
| 2.9.2 纯化回收变性处理的基因组DNA | 第30页 |
| 2.9.3 MSP引物设计 | 第30页 |
| 2.9.4 甲基化特异位点PCR反应体系及程序 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-46页 |
| 3.1 香蕉枯萎病病菌接种 | 第31页 |
| 3.2 香蕉叶片总DNA及总RNA提取 | 第31-32页 |
| 3.3 香蕉叶片总DNA甲基化敏感扩增多态性分析(MSAP) | 第32-36页 |
| 3.3.1 DNA酶切片段的预扩增 | 第32-33页 |
| 3.3.2 选择性扩增 | 第33页 |
| 3.3.3 DNA甲基化敏感扩增多态性 | 第33-34页 |
| 3.3.4 巴西蕉基因组DNA甲基化水平概况 | 第34-35页 |
| 3.3.5 枯萎病菌胁迫下的巴西蕉基因组DNA超甲基化 | 第35-36页 |
| 3.4 甲基化差异片段的分离与分析 | 第36-41页 |
| 3.4.1 甲基化差异片段的克隆及测序 | 第36-37页 |
| 3.4.2 甲基化差异片段的序列分析 | 第37-41页 |
| 3.5 甲基化差异片段M27的侧翼扩增及生物信息学分析 | 第41-44页 |
| 3.5.1 改良TAIL-PCR对M27侧翼的扩增 | 第41-43页 |
| 3.5.2 甲基化差异片段M27侧翼序列的测序分析 | 第43-44页 |
| 3.6 NBS-RGC5同源基因M27的CpG岛预测及甲基化特异性PCR验证 | 第44-46页 |
| 4 讨论 | 第46-51页 |
| 4.1 DNA甲基化与香蕉枯萎病 | 第46-48页 |
| 4.1.1 枯萎病胁迫下的香蕉基因组DNA超甲基化 | 第46-47页 |
| 4.1.2 枯萎病胁迫下巴西蕉抗性蛋白编码基因的去甲基化 | 第47-48页 |
| 4.2 改良的TAIL-PCR对未知基因侧翼序列扩增 | 第48-49页 |
| 4.3 甲基化特异性PCR(MSP)技术在植物DNA甲基化中的应用 | 第49-51页 |
| 4.3.1 植物中DNA变性处理后无需进行琼脂糖检测 | 第49-50页 |
| 4.3.2 MSP反应体系的控制 | 第50页 |
| 4.3.3 MSP的引物设计的质量是扩增成败的关键性因素 | 第50-51页 |
| 5 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
