摘要 | 第3-5页 |
Abstract | 第5-6页 |
1 前言 | 第12-21页 |
1.1 香蕉采后生理学及分子生物学的研究状况 | 第12-14页 |
1.1.1 香蕉成熟的特点 | 第12页 |
1.1.2 香蕉采后贮藏及保鲜技术研究进展 | 第12-13页 |
1.1.3 香蕉采后成熟分子机理研究进展 | 第13-14页 |
1.2 转录因子DREB的研究进展 | 第14-16页 |
1.2.1 DRE/CRT元件与DREB转录因子 | 第14-15页 |
1.2.2 DREB转录因子介导的植物抗逆性 | 第15-16页 |
1.2.3 果实DREB转录因子的研究概况 | 第16页 |
1.3 植物MAPK研究进展 | 第16-20页 |
1.3.1 植物MAPK的结构与分类 | 第17-18页 |
1.3.2 植物MAPK级联系统 | 第18页 |
1.3.3 MAPK在植物体中的功能 | 第18-19页 |
1.3.4 植物MAPK的下游作用因子 | 第19-20页 |
1.4 本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
2 材料与方法 | 第21-38页 |
2.1 供试材料 | 第21页 |
2.2 香蕉果实处理及取样方法 | 第21-22页 |
2.3 香蕉果实总RNA的提取及检测 | 第22-23页 |
2.4 cDNA模板制备 | 第23-24页 |
2.5 染色体免疫共沉淀ChIP的实验步骤 | 第24-29页 |
2.6 实时荧光定量PCR(RT-qPCR) | 第29-30页 |
2.7 香蕉MaMPK1-3 和MaE3-1/2/3 基因全长c DNA的克隆 | 第30-31页 |
2.8 MaMPK1-3 和MaE3-1/2/3 的氨基酸序列分析 | 第31页 |
2.8.1 MaMPK1-3 的氨基酸序列分析 | 第31页 |
2.8.2 MaE3-1/2/3 的氨基酸序列分析 | 第31页 |
2.9 MaMPK1-3 和MaE3-1/2/3 的转录激活分析 | 第31-33页 |
2.9.1 酵母菌株 | 第31-32页 |
2.9.2 载体构建 | 第32页 |
2.9.3 酵母感受态细胞的制备及PEG\Li Ac介导的质粒转化 | 第32-33页 |
2.9.4 a-半乳糖苷酶(a-galactosidase)活性检测 | 第33页 |
2.10 酵母双杂交分析蛋白互作 | 第33-34页 |
2.11 BiFC验证 | 第34-36页 |
2.11.1 载体的构建 | 第34-35页 |
2.11.2 根瘤农杆菌电感受态细胞的制备与电激转化 | 第35页 |
2.11.3 农杆菌注射侵染烟草叶背面 | 第35-36页 |
2.12 烟草BY2悬浮细胞系细胞原生质体中的亚细胞定位 | 第36-37页 |
2.12.1 瞬时表达质粒的构建 | 第36页 |
2.12.2 PEG介导的烟草BY2悬浮细胞系细胞原生质体转化法 | 第36-37页 |
2.13 双荧光素酶报告基因实验(DLR) | 第37-38页 |
2.13.1 表达载体的构建 | 第37-38页 |
2.13.2 农杆菌注射侵染烟草叶背面 | 第38页 |
3 结果与分析 | 第38-56页 |
3.1 ChIP-qPCR验证MaDREB2与MaMAPKs启动子的结合 | 第38-39页 |
3.2 MaMPK1-3 基因全长的克隆和氨基酸序列分析 | 第39-44页 |
3.2.1 MaMPK1-3 基因全长c DNA的克隆和序列分析 | 第39-40页 |
3.2.2MaMPK1-3 的进化关系分析 | 第40-41页 |
3.2.3 MaMPK1-3 氨基酸同源性分析 | 第41-44页 |
3.3 香蕉果实采后成熟过程中MaMPK1-3 基因的表达特性 | 第44-45页 |
3.3.1 MaMPK1-3 基因荧光引物的筛选 | 第44页 |
3.3.2 MaMPK1-3 基因在香蕉果实成熟过程中的表达 | 第44-45页 |
3.4 MaMPK1-3 在酵母体内的转录活性分析 | 第45-46页 |
3.5 MaMPK1-3 与MaDREB2的蛋白互作分析 | 第46-48页 |
3.5.1 酵母双杂交分析MaMPK1-3 与MaDREB2的蛋白互作 | 第46-47页 |
3.5.2 双分子荧光互补技术(BiFC)验证MaMPK2与MaDREB2的蛋白互作 | 第47-48页 |
3.6 MaMPK2蛋白的亚细胞定位分析 | 第48-49页 |
3.7 MaMPK2削弱MaDREB2对下游靶基因的转录激活能力 | 第49-50页 |
3.8 MaE3-1/2/3 基因全长c DNA的克隆和氨基酸序列分析 | 第50-52页 |
3.8.1 MaE3-1/2/3 基因全长c DNA的克隆和序列分析 | 第50-51页 |
3.8.2 MaE3-1/2/3 的氨基酸序列分析 | 第51-52页 |
3.9 MaE3-1/2/3 在酵母体内的转录活性分析 | 第52-53页 |
3.10 酵母双杂交分析MaE3-1/2/3 与MaDREB2的蛋白互作 | 第53-54页 |
3.11 BiFC验证MaE3-2/3 与MaDREB2的蛋白互作 | 第54-55页 |
3.12 香蕉果实采后成熟过程中MaE3-2 和MaE3-3 基因的表达特性 | 第55-56页 |
3.12.1 MaE3-2/3 基因荧光引物的筛选 | 第55页 |
3.12.2 MaE3-2/3 基因在香蕉果实成熟过程中的表达 | 第55-56页 |
4 讨论 | 第56-58页 |
4.1 MaMPK1-3 结构和表达分析 | 第56-57页 |
4.1.1 MaMPK1-3 结构分析 | 第56页 |
4.1.2 MaMPK1-3 表达分析 | 第56-57页 |
4.2 MaMPK1-3 与成熟相关转录因子MaDREB2关系分析 | 第57页 |
4.3 香蕉成熟相关转录因子MaDREB2磷酸化修饰对下游靶基因的影响 | 第57-58页 |
4.4 MaDREB2与MaE3互作关系研究 | 第58页 |
5 结论 | 第58-60页 |
致谢 | 第60-61页 |
参考文献 | 第61-72页 |