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香蕉成熟相关转录因子MaDREB2互作蛋白的筛选与鉴定

摘要第3-5页
Abstract第5-6页
1 前言第12-21页
    1.1 香蕉采后生理学及分子生物学的研究状况第12-14页
        1.1.1 香蕉成熟的特点第12页
        1.1.2 香蕉采后贮藏及保鲜技术研究进展第12-13页
        1.1.3 香蕉采后成熟分子机理研究进展第13-14页
    1.2 转录因子DREB的研究进展第14-16页
        1.2.1 DRE/CRT元件与DREB转录因子第14-15页
        1.2.2 DREB转录因子介导的植物抗逆性第15-16页
        1.2.3 果实DREB转录因子的研究概况第16页
    1.3 植物MAPK研究进展第16-20页
        1.3.1 植物MAPK的结构与分类第17-18页
        1.3.2 植物MAPK级联系统第18页
        1.3.3 MAPK在植物体中的功能第18-19页
        1.3.4 植物MAPK的下游作用因子第19-20页
    1.4 本研究的目的和意义第20-21页
2 材料与方法第21-38页
    2.1 供试材料第21页
    2.2 香蕉果实处理及取样方法第21-22页
    2.3 香蕉果实总RNA的提取及检测第22-23页
    2.4 cDNA模板制备第23-24页
    2.5 染色体免疫共沉淀ChIP的实验步骤第24-29页
    2.6 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)第29-30页
    2.7 香蕉MaMPK1-3 和MaE3-1/2/3 基因全长c DNA的克隆第30-31页
    2.8 MaMPK1-3 和MaE3-1/2/3 的氨基酸序列分析第31页
        2.8.1 MaMPK1-3 的氨基酸序列分析第31页
        2.8.2 MaE3-1/2/3 的氨基酸序列分析第31页
    2.9 MaMPK1-3 和MaE3-1/2/3 的转录激活分析第31-33页
        2.9.1 酵母菌株第31-32页
        2.9.2 载体构建第32页
        2.9.3 酵母感受态细胞的制备及PEG\Li Ac介导的质粒转化第32-33页
        2.9.4 a-半乳糖苷酶(a-galactosidase)活性检测第33页
    2.10 酵母双杂交分析蛋白互作第33-34页
    2.11 BiFC验证第34-36页
        2.11.1 载体的构建第34-35页
        2.11.2 根瘤农杆菌电感受态细胞的制备与电激转化第35页
        2.11.3 农杆菌注射侵染烟草叶背面第35-36页
    2.12 烟草BY2悬浮细胞系细胞原生质体中的亚细胞定位第36-37页
        2.12.1 瞬时表达质粒的构建第36页
        2.12.2 PEG介导的烟草BY2悬浮细胞系细胞原生质体转化法第36-37页
    2.13 双荧光素酶报告基因实验(DLR)第37-38页
        2.13.1 表达载体的构建第37-38页
        2.13.2 农杆菌注射侵染烟草叶背面第38页
3 结果与分析第38-56页
    3.1 ChIP-qPCR验证MaDREB2与MaMAPKs启动子的结合第38-39页
    3.2 MaMPK1-3 基因全长的克隆和氨基酸序列分析第39-44页
        3.2.1 MaMPK1-3 基因全长c DNA的克隆和序列分析第39-40页
        3.2.2MaMPK1-3 的进化关系分析第40-41页
        3.2.3 MaMPK1-3 氨基酸同源性分析第41-44页
    3.3 香蕉果实采后成熟过程中MaMPK1-3 基因的表达特性第44-45页
        3.3.1 MaMPK1-3 基因荧光引物的筛选第44页
        3.3.2 MaMPK1-3 基因在香蕉果实成熟过程中的表达第44-45页
    3.4 MaMPK1-3 在酵母体内的转录活性分析第45-46页
    3.5 MaMPK1-3 与MaDREB2的蛋白互作分析第46-48页
        3.5.1 酵母双杂交分析MaMPK1-3 与MaDREB2的蛋白互作第46-47页
        3.5.2 双分子荧光互补技术(BiFC)验证MaMPK2与MaDREB2的蛋白互作第47-48页
    3.6 MaMPK2蛋白的亚细胞定位分析第48-49页
    3.7 MaMPK2削弱MaDREB2对下游靶基因的转录激活能力第49-50页
    3.8 MaE3-1/2/3 基因全长c DNA的克隆和氨基酸序列分析第50-52页
        3.8.1 MaE3-1/2/3 基因全长c DNA的克隆和序列分析第50-51页
        3.8.2 MaE3-1/2/3 的氨基酸序列分析第51-52页
    3.9 MaE3-1/2/3 在酵母体内的转录活性分析第52-53页
    3.10 酵母双杂交分析MaE3-1/2/3 与MaDREB2的蛋白互作第53-54页
    3.11 BiFC验证MaE3-2/3 与MaDREB2的蛋白互作第54-55页
    3.12 香蕉果实采后成熟过程中MaE3-2 和MaE3-3 基因的表达特性第55-56页
        3.12.1 MaE3-2/3 基因荧光引物的筛选第55页
        3.12.2 MaE3-2/3 基因在香蕉果实成熟过程中的表达第55-56页
4 讨论第56-58页
    4.1 MaMPK1-3 结构和表达分析第56-57页
        4.1.1 MaMPK1-3 结构分析第56页
        4.1.2 MaMPK1-3 表达分析第56-57页
    4.2 MaMPK1-3 与成熟相关转录因子MaDREB2关系分析第57页
    4.3 香蕉成熟相关转录因子MaDREB2磷酸化修饰对下游靶基因的影响第57-58页
    4.4 MaDREB2与MaE3互作关系研究第58页
5 结论第58-60页
致谢第60-61页
参考文献第61-72页

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