| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 1 前言 | 第9-14页 |
| 1.1 提高动物克隆效率的研究进展 | 第10-12页 |
| 1.2 抑制组蛋白H3K9me3对动物克隆效率的影响 | 第12-14页 |
| 1.3 研究目的和意义 | 第14页 |
| 2 材料与方法 | 第14-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第14-17页 |
| 2.1.1 质粒、细胞株和猪克隆胚胎 | 第14页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第14-15页 |
| 2.1.3 主要溶液及培养基配置 | 第15-16页 |
| 2.1.4 主要实验用仪器 | 第16-17页 |
| 2.1.5 数据分析及图片处理软件 | 第17页 |
| 2.2 实验方法 | 第17-28页 |
| 2.2.1 技术路线 | 第17-19页 |
| 2.2.2 过表达组蛋白H3K9me3去甲基化酶KDM4A/B/D mRNA | 第19-23页 |
| 2.2.3 RNAi抑制组蛋白H3K9me3甲基转移酶SUV39H1/H2 | 第23-27页 |
| 2.2.4 免疫荧光法检测转染细胞中组蛋白H3K9me3表达水平 | 第27页 |
| 2.2.5 免疫荧光法检测克隆胚胎中组蛋白H3K9me3表达水平 | 第27-28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-43页 |
| 3.1 组蛋白H3K9ME3去甲基化酶KDM4A/B/D mRNA的获得 | 第28-31页 |
| 3.1.1 KDM4A/B/D基因克隆 | 第28-29页 |
| 3.1.2 KDM4A/B/D质粒DNA 酶切鉴定 | 第29-30页 |
| 3.1.3 KDM4A/B/D质粒DNA线性化、纯化、体外转录及加Poly(A)尾 | 第30-31页 |
| 3.2 胞浆显微注射KDM4A/B/D mRNA对猪克隆胚胎体外发育效率的影响 | 第31-34页 |
| 3.2.1 胞浆显微注射KDM4A/B/D mRNA | 第31-32页 |
| 3.2.2 胞浆显微注射KDM4A/B/D mRNA猪克隆胚胎体外发育效率的变化 | 第32-33页 |
| 3.2.3 胞浆显微注射KDM4A/B/D mRNA猪克隆胚胎组蛋白H3K9me3表达水平的变化 | 第33-34页 |
| 3.3 组蛋白H3K9me3甲基转移酶SUV39H1/H2最优siRNA的获得 | 第34-38页 |
| 3.3.1 SUV39H1/H2 siRNA的合成 | 第34-35页 |
| 3.3.2 SUV39H1/H2最优siRNA的筛选 | 第35-36页 |
| 3.3.3 最佳转染条件的确定 | 第36-38页 |
| 3.4 SUV39H1/H2 SIRNA共转染供体细胞对猪克隆胚胎体外发育效率的影响 | 第38-43页 |
| 3.4.1 SUV39H1/H2 siRNA共转染供体细胞 | 第38-39页 |
| 3.4.2 SUV39H1/H2 siRNA共转染供体细胞猪克隆胚胎体外发育效率的变化 | 第39-41页 |
| 3.4.3 SUV39H1/H2 siRNA共转染供体细胞组蛋白H3K9me3表达水平的变化 | 第41-42页 |
| 3.4.4 SUV39H1/H2 siRNA转染供体细胞克隆胚胎组蛋白H3K9me3表达水平的变化 | 第42-43页 |
| 4 讨论与结论 | 第43-48页 |
| 4.1 注射KDM4A/B/D mRNA无法显著擦除猪克隆胚胎H3K9me3的可能原因 | 第43-45页 |
| 4.2 转染siRNA无法显著擦除猪体细胞H3K9me3的可能原因 | 第45-46页 |
| 4.3 可用于擦除猪克隆胚胎H3K9me3的其他可能方法 | 第46-47页 |
| 4.4 组蛋白H3K9me3甲基化与猪克隆胚胎发育效率的关系 | 第47-48页 |
| 5 结论 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
