| 致谢 | 第10-11页 |
| 中文摘要 | 第11-13页 |
| ABSTRACT | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-34页 |
| 1 纤维素资源及其应用现状 | 第16-17页 |
| 2 纤维素酶 | 第17-24页 |
| 2.1 纤维素酶的类型 | 第17-18页 |
| 2.2 纤维素酶的作用机理 | 第18-19页 |
| 2.3 纤维素酶的研究历史 | 第19页 |
| 2.4 纤维素酶的来源 | 第19-21页 |
| 2.4.1 动物纤维素酶 | 第19-20页 |
| 2.4.2 微生物纤维素酶 | 第20页 |
| 2.4.3 植物纤维素酶 | 第20-21页 |
| 2.5 纤维素酶的应用及其前景 | 第21-24页 |
| 2.5.1 在食品工业中的应用 | 第21-22页 |
| 2.5.2 在饲料工业中的应用 | 第22页 |
| 2.5.3 在纺织业和洗涤剂业中的应用 | 第22-23页 |
| 2.5.4 在其他领域中的应用 | 第23-24页 |
| 2.5.5 在能源工业中的应用前景 | 第24页 |
| 3 白蚁纤维素酶概况 | 第24-28页 |
| 3.1 白蚁分类 | 第25-26页 |
| 3.2 白蚁纤维素酶的来源 | 第26-28页 |
| 3.2.1 白蚁外源性纤维素酶的来源 | 第26-27页 |
| 3.2.1.1 低等白蚁肠道共生原生动物 | 第26-27页 |
| 3.2.1.2 白蚁肠道共生细菌 | 第27页 |
| 3.2.1.3 高等白蚁体外共生真菌 | 第27页 |
| 3.2.2 白蚁内源性纤维素酶的来源 | 第27-28页 |
| 4 白蚁内源性纤维素酶基因的异源表达 | 第28-31页 |
| 4.1 内切-β-1,4-葡聚糖酶基因的异源表达 | 第29-30页 |
| 4.2 β-葡萄糖苷酶基因的异源表达 | 第30-31页 |
| 5 毕赤酵母表达系统概述 | 第31-32页 |
| 6 展望 | 第32-33页 |
| 7 本论文研究的目的和意义 | 第33-34页 |
| 第二章 黑翅土白蚁内源性纤维素酶编码基因的克隆 | 第34-46页 |
| 1 引言 | 第34页 |
| 2 材料与方法 | 第34-41页 |
| 2.1 白蚁 | 第34页 |
| 2.2 工具酶与试剂 | 第34页 |
| 2.3 仪器 | 第34-35页 |
| 2.4 培养基与溶液配制 | 第35页 |
| 2.5 总RNA提取 | 第35-36页 |
| 2.6 第一链cDNA的合成 | 第36页 |
| 2.7 引物设计与纤维素酶基因ORF的扩增 | 第36-41页 |
| 2.7.1 内切-β-1,4-葡聚糖酶cDNA片段的扩增 | 第36-37页 |
| 2.7.2 β-葡萄糖苷酶cDNA片段的扩增 | 第37-38页 |
| 2.7.3 克隆载体pMD18-T-OfEG/OfBG的构建 | 第38-39页 |
| 2.7.4 大肠杆菌感受态的制备 | 第39-40页 |
| 2.7.5 转化筛选 | 第40页 |
| 2.7.6 重组子筛选与PCR检测 | 第40-41页 |
| 2.7.7 基因测序分析 | 第41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-45页 |
| 3.1 总RNA的提取 | 第41-44页 |
| 3.1.1 内切-β-1,4-葡聚糖酶基因ORF的克隆 | 第42-43页 |
| 3.1.2 β-葡萄糖苷酶基因ORF的克隆 | 第43-44页 |
| 3.2 黑翅土白蚁纤维素酶基因cDNA序列分析 | 第44-45页 |
| 3.2.1 内切-β-1,4-葡聚糖酶基因cDNA的不含信号肽的ORF序列分析 | 第44页 |
| 3.2.2 β-葡萄糖苷酶基因cDNA的ORF序列分析 | 第44-45页 |
| 4 本章小结 | 第45-46页 |
| 第三章 表达载体的构建及在毕赤酵母中的表达 | 第46-76页 |
| 1 引言 | 第46页 |
| 2 材料与方法 | 第46-63页 |
| 2.1 菌株、载体与试剂 | 第46页 |
| 2.2 培养基 | 第46-48页 |
| 2.2.1 培养基母液配制 | 第47页 |
| 2.2.2 培养基配制 | 第47-48页 |
| 2.3 蛋白质SDS-PAGE溶液配制 | 第48-49页 |
| 2.4 表达载体的构建 | 第49-52页 |
| 2.4.1 引物的设计与合成 | 第49-50页 |
| 2.4.2 PCR反应 | 第50-52页 |
| 2.5 电击法转化Pichia pastoris KM71 | 第52-54页 |
| 2.5.1 毕赤酵母感受态制备 | 第52-53页 |
| 2.5.2 电击转化样品准备 | 第53-54页 |
| 2.5.3 Pichia pastoris KM71感受态细胞的电转化 | 第54页 |
| 2.6 重组酵母菌的诱导表达 | 第54-58页 |
| 2.6.1 表达产物的提取 | 第55-56页 |
| 2.6.2 SDS-PAGE电泳及Western Blot分析 | 第56-58页 |
| 2.7 表达产物的酶活测定 | 第58-61页 |
| 2.7.1 葡萄糖标准曲线的制作 | 第58-59页 |
| 2.7.2 重组酶酶活的定性检测 | 第59-61页 |
| 2.8 诱导表达条件进一步优化 | 第61页 |
| 2.9 目的蛋白部分酶学特性探究 | 第61-62页 |
| 2.9.1 不同pH对酶活的影响 | 第61页 |
| 2.9.2 不同温度对酶活的影响 | 第61-62页 |
| 2.9.3 不同金属离子对酶活的影响 | 第62页 |
| 2.10 纤维素酶协同作用试验 | 第62-63页 |
| 3 结果与分析 | 第63-73页 |
| 3.1 表达载体的构建 | 第63-68页 |
| 3.2 SDS-PAGE电泳及Western-Blot分析 | 第68-69页 |
| 3.3 诱导表达条件优化结果 | 第69-70页 |
| 3.4 目的蛋白部分酶学性质探究 | 第70-72页 |
| 3.4.1 不同pH对酶活的影响 | 第70-71页 |
| 3.4.2 不同温度对酶活的影响 | 第71页 |
| 3.4.3 不同金属离子对酶活的影响 | 第71-72页 |
| 3.5 纤维素酶协同试验 | 第72-73页 |
| 4 本章小结 | 第73-76页 |
| 第四章 总结与展望 | 第76-79页 |
| 1 讨论 | 第76-77页 |
| 2 本研究的创新点 | 第77-78页 |
| 3 研究展望 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-84页 |
