| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-25页 |
| 1.1 课题的提出 | 第12-13页 |
| 1.2 成花基因FT的研究进展 | 第13-22页 |
| 1.2.1 以成花基因FT为中心的成花调控网络 | 第13-20页 |
| 1.2.1.1 成花相关基因对FT的转录的影响 | 第13-16页 |
| 1.2.1.2 成花相关microRNAs对FT的转录的影响 | 第16-17页 |
| 1.2.1.3 表观遗传对FT的转录的影响 | 第17-18页 |
| 1.2.1.4 FT蛋白的功能 | 第18-20页 |
| 1.2.2 FT信号移动的研究进展 | 第20-22页 |
| 1.2.2.1 FTIP1 介导的FT蛋白的转运机制 | 第20-22页 |
| 1.3 本实验研究的内容和意义 | 第22-25页 |
| 2 材料和方法 | 第25-48页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-29页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第25-26页 |
| 2.1.2 菌种材料 | 第26页 |
| 2.1.3 载体质粒材料 | 第26-27页 |
| 2.1.4 实验仪器和试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.4.1 实验仪器 | 第27页 |
| 2.1.4.2 实验试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.5 转化和组织培养的培养基的配方 | 第28-29页 |
| 2.1.5.1 烟草的农杆菌转化培养基配方 | 第28页 |
| 2.1.5.2 普通枳的农杆菌转化培养基配方 | 第28-29页 |
| 2.1.5.3 酵母双杂共转化的培养基配方 | 第29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-48页 |
| 2.2.1 PtFT::GUS的超表达载体和PtFT酵母单杂、双杂载体构建 | 第29-38页 |
| 2.2.1.1 PtFT::GUS的超表达载体构建 | 第29-30页 |
| 2.2.1.2 PtFT启动子酵母单杂的载体构建 | 第30页 |
| 2.2.1.3 PtFTcDNA酵母双杂的载体构建 | 第30-31页 |
| 2.2.1.4 PtFT::GUS的超表达载体和FT酵母单杂、双杂载体构建的引物设计 | 第31-32页 |
| 2.2.1.5 目的片段的扩增 | 第32-33页 |
| 2.2.1.6 PtFT启动子和PtFTcDNA的回收 | 第33页 |
| 2.2.1.7 通用载体的连接 | 第33页 |
| 2.2.1.8 通用载体的大肠杆菌的转化及检测 | 第33-34页 |
| 2.2.1.9 通用载体的大肠杆菌的质粒提取 | 第34-35页 |
| 2.2.1.10 双酶切和单酶切目的片段 | 第35-37页 |
| 2.2.1.11 单酶切和双酶切产物的回收 | 第37页 |
| 2.2.1.12 PtFT::GUS、PtFTcDNA、PtFT启动子与各自载体的连接 | 第37-38页 |
| 2.2.1.13 目的片段和其载体的大肠杆菌感受态转化及检测 | 第38页 |
| 2.2.1.14 目的片段和其载体的大肠杆菌的质粒提取 | 第38页 |
| 2.2.1.15 目的片段和其载体的农杆菌感受态转化及检测 | 第38页 |
| 2.2.2 无菌烟草的制备 | 第38页 |
| 2.2.3 农杆菌介导的PtFT::GUS烟草转化 | 第38-39页 |
| 2.2.3.1 PtFT::GUS农杆菌菌液的制备 | 第38-39页 |
| 2.2.3.2 烟草叶片的PtFT::GUS农杆菌侵染与共培养 | 第39页 |
| 2.2.3.3 筛选转化烟草及其生根培养 | 第39页 |
| 2.2.3.4 转PtFT::GUS基因烟草的移栽 | 第39页 |
| 2.2.4 转基因烟草苗的DNA水平上的鉴定 | 第39-40页 |
| 2.2.4.1 转PtFT::GUS基因烟草的基因组DNA提取 | 第39-40页 |
| 2.2.4.2 转PtFT::GUS基因烟草的PCR鉴定 | 第40页 |
| 2.2.5 农杆菌介导的PtFT::GUS基因的普通枳的转化 | 第40-41页 |
| 2.2.5.1 无菌普通枳苗的准备 | 第40页 |
| 2.2.5.2 PtFT::GUS农杆菌菌液的制备 | 第40-41页 |
| 2.2.5.3 普通枳的PtFT::GUS农杆菌侵染与共培养 | 第41页 |
| 2.2.5.4 PtFT::GUS转化普通枳的筛选培养 | 第41页 |
| 2.2.5.5 PtFT::GUS转化普通枳的诱导生根 | 第41页 |
| 2.2.6 PtFT::GUS转基因烟草的GUS染色 | 第41-42页 |
| 2.2.6.1 GUS染色液的制备 | 第41-42页 |
| 2.2.6.2 PtFT::GUS烟草的GUS染色 | 第42页 |
| 2.2.7 PtFT转基因烟草和野生型烟草的种植及嫁接 | 第42-43页 |
| 2.2.7.1 PtFT转基因烟草和野生型烟草的种植 | 第42-43页 |
| 2.2.7.2 PtFT转基因烟草和野生型烟草的嫁接 | 第43页 |
| 2.2.8 PtFT转基因和野生型嫁接烟草的信号移动检测 | 第43-45页 |
| 2.2.8.1 PtFT转基因和野生型嫁接烟草的RNA提取 | 第43-44页 |
| 2.2.8.2 PtFT转基因和野生型嫁接烟草的RNA质量检测 | 第44页 |
| 2.2.8.3 PtFT转基因和野生型嫁接烟草的RNA的反转录 | 第44-45页 |
| 2.2.8.4 PtFT转基因和野生型嫁接烟草的cDNA的PCR检测 | 第45页 |
| 2.2.9 PtFTcDNA的酵母双杂交 | 第45-48页 |
| 2.2.9.1 双杂交酵母质粒的提取 | 第45-46页 |
| 2.2.9.2 PtFTcDNA的酵母双杂交 | 第46-48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-71页 |
| 3.1 PtFT::GUS的超表达载体的构建 | 第48-50页 |
| 3.1.1 pCAMBIA1301 载体和PtFTcDNA的单酶切 | 第48页 |
| 3.1.2 PtFT::GUS的超表达载体的大肠杆菌PCR检测 | 第48-49页 |
| 3.1.3 PtFT::GUS的超表达载体的农杆菌PCR检测 | 第49-50页 |
| 3.2 PtFTcDNA的酵母双杂的载体的构建 | 第50-52页 |
| 3.2.1 pGBKT7 载体和PtFTcDNA的双酶切 | 第50页 |
| 3.2.2 PtFTcDNA的酵母双杂的载体的大肠杆菌PCR检测 | 第50-51页 |
| 3.2.3 PtFTcDNA的酵母双杂的载体的农杆菌PCR检测 | 第51-52页 |
| 3.3 PtFT启动子酵母单杂的载体构建 | 第52-54页 |
| 3.3.1 pHIS2 载体和PtFT启动子的双酶切 | 第52页 |
| 3.3.2 PtFT启动子酵母单杂载体的大肠杆菌PCR检测 | 第52-53页 |
| 3.3.3 PtFT启动子酵母单杂载体的农杆菌PCR检测 | 第53-54页 |
| 3.4 农杆菌介导的PtFT::GUS烟草转化及其鉴定 | 第54-59页 |
| 3.4.1 农杆菌介导的PtFT::GUS烟草转化 | 第54-55页 |
| 3.4.2 PtFT::GUS烟草阳性苗的DNA检测 | 第55-57页 |
| 3.4.3 PtFT::GUS烟草阳性苗的GUS染色检测 | 第57页 |
| 3.4.4 PtFT::GUS烟草阳性苗的表型观察分析 | 第57-59页 |
| 3.5 农杆菌介导的PtFT::GUS普通枳转化 | 第59-61页 |
| 3.6 PtFT转基因烟草和野生型烟草的表型统计与分析 | 第61-62页 |
| 3.7 PtFT转基因烟草和野生型烟草的嫁接及其鉴定 | 第62-71页 |
| 3.7.1 PtFT转基因烟草和野生型烟草的嫁接 | 第62-63页 |
| 3.7.2 PtFT转基因和野生型嫁接烟草的表型观察与统计 | 第63-67页 |
| 3.7.3 PtFT转基因和野生型嫁接烟草的信号移动检测 | 第67-71页 |
| 3.7.3.1 PtFT转基因和野生型嫁接烟草的RNA提取 | 第67页 |
| 3.7.3.2 PtFT转基因和野生型嫁接烟草的cDNA合成以及PCR检测 | 第67-71页 |
| 4 讨论 | 第71-75页 |
| 4.1 转基因PtFT对烟草表型的影响 | 第71-72页 |
| 4.2 FT信号移动的探究 | 第72-74页 |
| 4.3 研究展望 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-88页 |
| 附录（Appendix） | 第88-94页 |
| 1. PtFT转基因和野生型嫁接烟草的RNA提取图 | 第88-91页 |
| 2. PtFT转基因和野生型嫁接烟草cDNA的Actin检测图 | 第91-94页 |
| 致谢 | 第94页 |
