| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-25页 |
| 1.1 阿魏酸酯酶研究现状 | 第12-23页 |
| 1.1.1 阿魏酸酯酶的分类 | 第12-14页 |
| 1.1.2 阿魏酸酯酶的底物特异性 | 第14-15页 |
| 1.1.3 阿魏酸酯酶的多样性 | 第15-17页 |
| 1.1.4 阿魏酸酯酶的生产和固态发酵现状 | 第17-18页 |
| 1.1.5 阿魏酸酯酶分子克隆研究进展 | 第18-19页 |
| 1.1.6 阿魏酸酯酶在释放羟基肉桂酸过程中的应用 | 第19-23页 |
| 1.2 酶结构截短研究现状 | 第23-24页 |
| 1.3 研究目的与意义 | 第24-25页 |
| 第二章 棒曲霉阿魏酸酯酶基因的克隆及融合蛋白的构建 | 第25-36页 |
| 2.1 材料 | 第25-26页 |
| 2.1.1 菌株、酶、药品 | 第25-26页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第26页 |
| 2.2 方法 | 第26-31页 |
| 2.2.1 质粒的转化与提取 | 第26-27页 |
| 2.2.2 目的基因PCR扩增 | 第27-29页 |
| 2.2.3 重组质粒构建 | 第29-30页 |
| 2.2.4 粗酶液制备 | 第30页 |
| 2.2.5 酶活性测定 | 第30-31页 |
| 2.3 结果分析 | 第31-34页 |
| 2.3.1 AcFae基因PCR扩增 | 第31-32页 |
| 2.3.2 重组质粒菌落PCR验证 | 第32-33页 |
| 2.3.3 重组质粒双酶切验证 | 第33-34页 |
| 2.3.4 DNA测序结果 | 第34页 |
| 2.4 结论和讨论 | 第34-36页 |
| 2.4.1 FAE活性的测定方法 | 第34页 |
| 2.4.2 AcFae融合蛋白的活性 | 第34-36页 |
| 第三章 双功能木聚糖酶-阿魏酸酯酶的生物信息学分析 | 第36-47页 |
| 3.1 方法 | 第36页 |
| 3.2 结果分析 | 第36-45页 |
| 3.2.1 理化性质分析 | 第36页 |
| 3.2.2 信号肽预测 | 第36-37页 |
| 3.2.3 跨膜结构域分析 | 第37页 |
| 3.2.4 亲疏水性分析 | 第37-38页 |
| 3.2.5 磷酸化位点预测 | 第38页 |
| 3.2.6 二级结构预测和分析 | 第38-41页 |
| 3.2.7 三级结构预测和分析 | 第41-43页 |
| 3.2.8 同源性比对 | 第43-44页 |
| 3.2.9 系统进化分析 | 第44-45页 |
| 3.3 结论和讨论 | 第45-47页 |
| 第四章 双功能木聚糖酶-阿魏酸酯酶基因的克隆及酶学性质研究 | 第47-59页 |
| 4.1 材料 | 第47页 |
| 4.2 方法 | 第47-51页 |
| 4.2.1 普雷沃氏菌基因组DNA的提取 | 第47页 |
| 4.2.2 质粒的转化与提取 | 第47页 |
| 4.2.3 双功能酶基因PCR扩增 | 第47-48页 |
| 4.2.4 PCR产物纯化与回收 | 第48页 |
| 4.2.5 重组质粒构建 | 第48-49页 |
| 4.2.6 粗酶液制备 | 第49页 |
| 4.2.7 酶活性测定 | 第49-50页 |
| 4.2.8 温度对酶活性和稳定性的影响 | 第50页 |
| 4.2.9 pH对酶活性和稳定性的影响 | 第50页 |
| 4.2.10 各种溶液对酶活的影响 | 第50-51页 |
| 4.3 结果分析 | 第51-57页 |
| 4.3.1 重组质粒构建 | 第51-53页 |
| 4.3.2 酶学性质分析 | 第53-57页 |
| 4.4 结论和讨论 | 第57-59页 |
| 4.4.1 普雷沃氏菌培养 | 第57-58页 |
| 4.4.2 双功能酶构建 | 第58-59页 |
| 第五章 双功能木聚糖酶-阿魏酸酯酶功能域分离研究 | 第59-67页 |
| 5.1 材料 | 第59页 |
| 5.2 方法 | 第59-60页 |
| 5.2.1 分离片段基因PCR扩增 | 第59-60页 |
| 5.3 结果分析 | 第60-66页 |
| 5.3.1 重组质粒构建 | 第60-63页 |
| 5.3.2 酶学性质分析 | 第63-66页 |
| 5.4 结论和讨论 | 第66-67页 |
| 第六章 双功能酶C末端阿魏酸酯酶改造的研究 | 第67-78页 |
| 6.1 材料 | 第67页 |
| 6.2 方法 | 第67-68页 |
| 6.2.1 改造片段基因PCR扩增 | 第67-68页 |
| 6.3 结果分析 | 第68-75页 |
| 6.3.1 重组质粒构建 | 第68-72页 |
| 6.3.2 酶学性质分析 | 第72-75页 |
| 6.4 结论和讨论 | 第75-78页 |
| 6.4.1 改造双功能酶C末端阿魏酸酯酶的活性 | 第75-76页 |
| 6.4.2 原始酶与改造酶的活性比较 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
