| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第12-26页 |
| 1 核盘菌及其菌核病 | 第12-13页 |
| 1.1 核盘菌的分类地位 | 第12页 |
| 1.2 菌核病的危害与防治 | 第12-13页 |
| 2 核盘菌生长发育研究进展 | 第13-17页 |
| 2.1 生活史与侵染循环 | 第13-14页 |
| 2.2 菌核发育 | 第14-16页 |
| 2.3 子囊盘发育 | 第16-17页 |
| 3 Forkhead转录因子概述 | 第17-20页 |
| 3.1 Forkhead蛋白简介 | 第17页 |
| 3.2 Forkhead蛋白主要生物学功能 | 第17-18页 |
| 3.3 Forkhead蛋白在真菌中的研究进展 | 第18-19页 |
| 3.4 FHA（Forkhead-associated domain）简介 | 第19-20页 |
| 4 蛋白质与DNA互作研究技术 | 第20-22页 |
| 4.1 酵母单杂交技术 | 第20-21页 |
| 4.2 染色质免疫沉淀技术 | 第21页 |
| 4.3 凝胶阻滞实验 | 第21-22页 |
| 4.4 足迹试验 | 第22页 |
| 4.5 其他技术 | 第22页 |
| 5 基因功能研究技术 | 第22-25页 |
| 5.1 基因敲除技术 | 第22页 |
| 5.2 RNA干扰技术 | 第22-23页 |
| 5.3 T-DNA插入 | 第23页 |
| 5.4 人工核酸内切酶技术 | 第23-25页 |
| 6 本研究的目的与意义 | 第25-26页 |
| 第二章 核盘菌Ss-FoxE2基因酵母单杂交诱饵载体及文库的构建 | 第26-42页 |
| 1 实验材料 | 第26-29页 |
| 1.1 菌株及载体 | 第26页 |
| 1.2 主要试剂 | 第26页 |
| 1.3 试剂配制 | 第26-28页 |
| 1.4 主要实验仪器 | 第28-29页 |
| 2 实验方法 | 第29-37页 |
| 2.1 核盘菌基因组的提取 | 第29页 |
| 2.2 酵母单杂交诱饵载体pHIS2::Ss-Fox E2的构建 | 第29-34页 |
| 2.3 酿酒酵母Y187的LiAc法转化 | 第34-35页 |
| 2.4 酵母转化子的验证 | 第35页 |
| 2.5 3-AT浓度的筛选 | 第35页 |
| 2.6 文库的构建及鉴定 | 第35-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-40页 |
| 3.1 Ss-FoxE2上游调控序列的克隆 | 第37页 |
| 3.2 pMD18T::Ss-FoxE2载体的鉴定 | 第37-38页 |
| 3.3 pHIS2::Ss-Fox E2载体的鉴定 | 第38-39页 |
| 3.5 酵母转化子的鉴定 | 第39-40页 |
| 3.6 诱饵载体 3-AT浓度的筛选 | 第40页 |
| 3.7 酵母文库质量的鉴定 | 第40页 |
| 4 小结 | 第40-42页 |
| 第三章 核盘菌Ss-FoxE2基因的互作蛋白的筛选及验证 | 第42-64页 |
| 1 实验材料 | 第42-45页 |
| 1.1 菌株及载体 | 第42页 |
| 1.2 主要试剂 | 第42页 |
| 1.3 试剂配制 | 第42-44页 |
| 1.4 主要实验仪器 | 第44-45页 |
| 2 实验方法 | 第45-55页 |
| 2.1 文库质粒的制备 | 第45页 |
| 2.2 酵母杂交文库的转化 | 第45-46页 |
| 2.3 阳性克隆的复筛 | 第46页 |
| 2.4 酵母质粒的提取 | 第46页 |
| 2.5 结果的初步验证 | 第46-48页 |
| 2.6 原核表达载体的构建 | 第48页 |
| 2.7 蛋白原核表达 | 第48-52页 |
| 2.8 凝胶阻滞电泳 | 第52-55页 |
| 3 结果与分析 | 第55-62页 |
| 3.1 筛选蛋白结果 | 第55-56页 |
| 3.2 AD载体的验证 | 第56页 |
| 3.3 阳性结果初步验证 | 第56-58页 |
| 3.4 原核表达载体的验证 | 第58页 |
| 3.5 蛋白表达检测 | 第58-59页 |
| 3.6 蛋白可溶性检测 | 第59-60页 |
| 3.7 蛋白质纯化 | 第60-61页 |
| 3.8 EMSA | 第61-62页 |
| 4 小结 | 第62-64页 |
| 第四章 核盘菌Ss-Chk2基因功能的分析 | 第64-73页 |
| 1 实验材料 | 第64-65页 |
| 1.1 菌株及载体 | 第64页 |
| 1.2 主要试剂 | 第64页 |
| 1.3 试剂配制 | 第64-65页 |
| 1.4 主要实验仪器 | 第65页 |
| 2 实验方法 | 第65-68页 |
| 2.1 敲除载体的构建 | 第65-66页 |
| 2.2 原生质体的制备 | 第66页 |
| 2.3 原生质体的转化 | 第66-67页 |
| 2.4 转化子的筛选 | 第67页 |
| 2.5 表型的观察 | 第67-68页 |
| 3 结果与分析 | 第68-72页 |
| 3.1 敲除载体的验证 | 第68页 |
| 3.2 原生质体的制备 | 第68-69页 |
| 3.3 转化子检测 | 第69页 |
| 3.4 表型分析 | 第69-72页 |
| 4 小结 | 第72-73页 |
| 全文结论 | 第73-74页 |
| 讨论 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-89页 |
| 致谢 | 第89页 |
