| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 英文缩略词表 | 第10-11页 |
| 引言 | 第11-13页 |
| 第一章 TDAG8和GPR4在酸性条件下对骨细胞调控的研究进展 | 第13-19页 |
| 酸性条件对成骨细胞的影响 | 第14-15页 |
| 酸性条件对与破骨细胞的影响 | 第15-16页 |
| GPR4与成骨细胞调控 | 第16-17页 |
| T细胞死亡相关基因8 (TDAG8)与破骨细胞调控 | 第17页 |
| 讨论 | 第17-19页 |
| 第二章 酸性条件抑制人成骨细胞hFOB的增殖和迁移 | 第19-32页 |
| 1 材料与方法 | 第19-27页 |
| 1.1 材料 | 第19-21页 |
| 1.1.1 实验器材 | 第19页 |
| 1.1.2 实验材料 | 第19-20页 |
| 1.1.3 实验试剂 | 第20页 |
| 1.1.4 常用溶剂的配置 | 第20-21页 |
| 1.1.5 数据处理 | 第21页 |
| 1.2 方法 | 第21-27页 |
| 1.2.1 人成骨细胞hFOB的培养 | 第21-23页 |
| 1.2.1.1 人成骨细胞hFOB的复苏 | 第21-22页 |
| 1.2.1.2 人成骨细胞hFOB的传代 | 第22-23页 |
| 1.2.1.3 人成骨细胞hFOB细胞的冻存 | 第23页 |
| 1.2.2 CCK法测定细胞增殖 | 第23-24页 |
| 1.2.3 酸性培养基刺激下人成骨细胞hFOB的增殖 | 第24-25页 |
| 1.2.4 酸性培养基刺激下人成骨细胞hFOB的迁移 | 第25-27页 |
| 2 结果与分析 | 第27-31页 |
| 2.1 人成骨细胞hFOB的培养 | 第27页 |
| 2.2 人成骨细胞hFOB的生长曲线 | 第27-28页 |
| 2.3 酸性培养基抑制hFOB细胞增殖 | 第28-29页 |
| 2.4 酸性培养基抑制hFOB细胞迁移 | 第29-31页 |
| 讨论 | 第31-32页 |
| 第三章 人成骨细胞hFOB中GPCR的表达情况及酸性条件下成骨性和破骨性因子的表达情况 | 第32-47页 |
| 1 材料与方法 | 第32-40页 |
| 1.1 材料 | 第32-34页 |
| 1.1.1 实验器材 | 第32页 |
| 1.1.2 实验试剂 | 第32-33页 |
| 1.1.3 常用溶剂的配置 | 第33-34页 |
| 1.2 方法 | 第34-40页 |
| 1.2.1 Real Time PCR检测hFOB细胞中GPCR的表达情况 | 第34-36页 |
| 1.2.1.1 细胞RNA的提取 | 第34-35页 |
| 1.2.1.2 反转录获取cDNA | 第35页 |
| 1.2.1.3 Rea Time PCR检测mRNA的表达量 | 第35-36页 |
| 1.2.2 Real Time PCR检测mRNA的表达量 | 第36-40页 |
| 1.2.2.1 Real Time PCR检测酸性条件下成骨细胞中的细胞因子mRNA的表达量 | 第36-38页 |
| 1.2.2.2 PCR扩增目的mRNA | 第38页 |
| 1.2.2.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第38页 |
| 1.2.2.4 BCA法测定蛋白浓度 | 第38-39页 |
| 1.2.2.5 ALP的测定 | 第39-40页 |
| 2 结果与分析 | 第40-46页 |
| 2.1 人成骨细胞hFOB中GPCR的表达情况 | 第40-41页 |
| 2.2 酸性条件下TDAG8与GPR4的表达情况 | 第41-42页 |
| 2.3 酸性条件下hFOB中成骨性因子和破骨性因子mRNA的表达量 | 第42-46页 |
| 讨论 | 第46-47页 |
| 第四章 探索酸性条件下TDAG8与GPR4的作用以及对成骨性和破骨性细胞因子的影响 | 第47-69页 |
| 1 材料与方法 | 第47-57页 |
| 1.1 材料 | 第47-49页 |
| 1.1.1 实验器材 | 第47-48页 |
| 1.1.2 实验试剂 | 第48页 |
| 1.1.3 常用试剂的配制 | 第48-49页 |
| 1.2 方法 | 第49-57页 |
| 1.2.1 制备过表达质粒 | 第49-51页 |
| 1.2.1.1 转化 | 第49页 |
| 1.2.1.2 无内毒素质粒抽提 | 第49-50页 |
| 1.2.1.3 PCR扩增目的基因 | 第50-51页 |
| 1.2.1.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第51页 |
| 1.2.2 过表达TDAG8和GPR4对成骨性因子和破骨性因子表达的影响 | 第51-57页 |
| 1.2.2.1 脂质体悬浮转染实验 | 第51-52页 |
| 1.2.2.2 脂质体贴壁转染实验 | 第52页 |
| 1.2.2.3 细胞RNA的提取 | 第52-53页 |
| 1.2.2.4 反转录获取cDNA | 第53页 |
| 1.2.2.5 Real Time PCR检测mRNA的表达量 | 第53-55页 |
| 1.2.2.6 PGE_2酶联免疫吸附测定(ELISA) | 第55页 |
| 1.2.2.7 酸性条件下过表达TDAG8和GPR4对hFOB存活能力的影响 | 第55-57页 |
| 2 结果与分析 | 第57-67页 |
| 2.1 过表达TDAG8与过表达质粒的筛选和验证 | 第57页 |
| 2.2 转染效率的摸索 | 第57-58页 |
| 2.3 转染过表达TDAG8质粒和GPR4质粒之后酸性刺激hFOB对其增殖的影响 | 第58-63页 |
| 2.4 转染过表达TDAG8质粒和GPR4质粒之后酸性刺激hFOB对成骨性因子的影响 | 第63-64页 |
| 2.5 转染过表达TDAG8质粒和GPR4质粒之后酸性刺激hFOB对破骨性因子的影响 | 第64-65页 |
| 2.6 转染过表达TDAG8质粒和GPR4质粒之后酸性刺激hFOB对PGE_2的表达情况 | 第65-67页 |
| 讨论 | 第67-69页 |
| 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
