| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 符号说明 | 第12-13页 |
| 第一部分 SATB1关联miRNAs在癌症中的研究进展 | 第13-19页 |
| 1 SATB1概述 | 第13-14页 |
| 2 miRNAs的概述 | 第14页 |
| 3 SATB1作为miRNAs特异靶基因的确定 | 第14-15页 |
| 4 SATB1关联miRNAs在肿瘤发生发展中的作用 | 第15-18页 |
| 5 结论与展望 | 第18-19页 |
| 第二部分 miR-3065-5p对肝癌细胞生物学特性的影响 | 第19-36页 |
| 1 绪论 | 第19页 |
| 2 实验材料与溶液配制 | 第19-21页 |
| 2.1 主要仪器 | 第19-20页 |
| 2.2 试剂及耗材 | 第20页 |
| 2.3 细胞材料 | 第20-21页 |
| 2.4 溶液配制 | 第21页 |
| 3 实验方法 | 第21-26页 |
| 3.1 细胞培养 | 第21-22页 |
| 3.1.1 细胞复苏 | 第21页 |
| 3.1.2 细胞传代 | 第21-22页 |
| 3.1.3 细胞计数和铺板 | 第22页 |
| 3.1.4 细胞冻存 | 第22页 |
| 3.2 总RNA提取 | 第22-23页 |
| 3.3 逆转录反应 | 第23页 |
| 3.4 实时荧光定量PCR (qRT-PCR) | 第23-24页 |
| 3.5 miR-3065-5p agomir转染实验 | 第24-25页 |
| 3.6 细胞增殖能力检测 | 第25页 |
| 3.7 细胞侵袭能力检测 | 第25页 |
| 3.8 克隆形成能力检测 | 第25-26页 |
| 3.9 细胞周期检测 | 第26页 |
| 4 实验结果 | 第26-33页 |
| 4.1 RNA提取质量鉴定 | 第26页 |
| 4.2 miR-3065-5p在三种不同侵袭性肝癌细胞系中的表达 | 第26-27页 |
| 4.3 miR-3065-5p agomir转染三种肝癌细胞效果验证 | 第27-28页 |
| 4.4 miR-3065-5p抑制三种肝癌细胞的增殖 | 第28-29页 |
| 4.5 miR-3065-5p抑制三种肝癌细胞的侵袭能力 | 第29-30页 |
| 4.6 miR-3065-5p抑制三种肝癌细胞的克隆形成能力 | 第30-32页 |
| 4.7 miR-3065-5p对三种肝癌细胞细胞周期无影响 | 第32-33页 |
| 5 讨论 | 第33-35页 |
| 6 小结 | 第35-36页 |
| 第三部分 miR-3065-5p通过靶向SATB1抑制肝癌细胞的生物活性 | 第36-48页 |
| 1 绪论 | 第36页 |
| 2 实验材料 | 第36-37页 |
| 2.1 主要仪器 | 第36页 |
| 2.2 试剂及耗材 | 第36-37页 |
| 3 实验方法 | 第37-42页 |
| 3.1 miR-3065-5p与靶基因互补结合位点的预测 | 第37页 |
| 3.2 双荧光素酶报告基因检测实验 | 第37-38页 |
| 3.2.1 质粒构建 | 第37页 |
| 3.2.2 双荧光素酶检测 | 第37-38页 |
| 3.3 过表达的miR-3065-5p对SATB1mRNA表达影响 | 第38-39页 |
| 3.3.1 细胞转染 | 第38页 |
| 3.3.2 转染细胞总RNA提取 | 第38页 |
| 3.3.3 逆转录反应 | 第38-39页 |
| 3.3.4 实时荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第39页 |
| 3.4 Western blot检测靶基因SATB1蛋白表达水平 | 第39-41页 |
| 3.4.1 细胞蛋白提取 | 第39-40页 |
| 3.4.2 BCA蛋白定量 | 第40页 |
| 3.4.3 Western blot | 第40-41页 |
| 3.5 siRNA干扰SATB1对肝癌细胞的抑制作用 | 第41-42页 |
| 3.5.1 siRNA转染肝癌细胞 | 第41-42页 |
| 3.5.2 实时荧光定量PCR检测干扰效果 | 第42页 |
| 3.5.3 siRNA干扰SATB1对肝癌细胞增殖的影响 | 第42页 |
| 3.6 SATB1在正常肝细胞L02和肝癌细胞HepG2中的mRNA表达水平 | 第42页 |
| 4 实验结果 | 第42-46页 |
| 4.1 生物信息学软件预测miR-3065-5p靶基因 | 第42-43页 |
| 4.2 双荧光素酶报告基因实验验证miR-3065-5p与SATB1互补结合 | 第43-44页 |
| 4.3 miR-3065-5p对SATB1 mRNA表达水平的影响 | 第44页 |
| 4.4 miR-3065-5p对SATB1蛋白表达水平的影响 | 第44-45页 |
| 4.5 siRNA干扰SATB1对肝癌细胞增殖的影响 | 第45-46页 |
| 5 讨论 | 第46-47页 |
| 6 结论 | 第47-48页 |
| 第四部分 miR-1307-5p对肝癌细胞生物学特性影响的初步探讨 | 第48-57页 |
| 1 绪论 | 第48页 |
| 2 实验材料 | 第48页 |
| 2.1 主要仪器 | 第48页 |
| 2.2 试剂及耗材 | 第48页 |
| 2.3 细胞材料 | 第48页 |
| 3 实验方法 | 第48-50页 |
| 3.1 细胞转染 | 第48-49页 |
| 3.2 细胞增殖能力检测 | 第49页 |
| 3.3 细胞侵袭能力检测 | 第49页 |
| 3.4 细胞划痕实验 | 第49页 |
| 3.5 克隆形成能力检测 | 第49页 |
| 3.6 细胞周期检测 | 第49页 |
| 3.7 miR-1307-5p与靶基因互补结合位点的预测 | 第49-50页 |
| 3.8 双荧光素酶报告基因检测实验 | 第50页 |
| 4 实验结果 | 第50-55页 |
| 4.1 miR1307-5p agomir转染HepG2细胞效果验证 | 第50页 |
| 4.2 miR-1307-5p抑制HepG2细胞的增殖 | 第50-51页 |
| 4.3 miR-1307-5p抑制HepG2细胞的侵袭能力 | 第51-52页 |
| 4.4 miR-1307-5p抑制HepG2细胞的迁移能力 | 第52-53页 |
| 4.5 miR-1307-5p抑制HepG2细胞的克隆形成能力 | 第53-54页 |
| 4.6 生物信息学软件预测miR-1307-5p靶基因 | 第54页 |
| 4.7 双荧光素酶报告基因实验 | 第54-55页 |
| 5 讨论 | 第55-56页 |
| 6 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
