| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-18页 |
| 1.1 鳞翅目昆虫及其分子机理研究方法概况 | 第12-13页 |
| 1.2 杆状病毒简介 | 第13-14页 |
| 1.3 四环素调控系统简介 | 第14-15页 |
| 1.4 Red重组系统简介 | 第15-16页 |
| 1.5 Bac-to-Bac系统简介 | 第16-17页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-47页 |
| 2.1 菌株、质粒以及细胞系 | 第18-19页 |
| 2.2 酶及试剂 | 第19页 |
| 2.3 溶液 | 第19-21页 |
| 2.4 培养基 | 第21页 |
| 2.5 引物 | 第21-24页 |
| 2.6 AcMNPV复制相关基因dnapol的功能验证 | 第24-33页 |
| 2.6.1 Ac~(KO) Bacmid的构建 | 第24-26页 |
| 2.6.2 Ac~(KO) EGFP Bacmid和Ac EGFP Bacmid的构建 | 第26-31页 |
| 2.6.3 Ac~(KO) EGFP Bacmid和Ac EGFP Bacmid转染Sf9细胞及观察 | 第31-33页 |
| 2.7 Ac~(KO) EGFP P_(tight)-dnapol Bacmid的构建及复制观察 | 第33-35页 |
| 2.7.1 pFastBac Dual-EGFP-P_(tight)-dnapol的构建 | 第33-35页 |
| 2.7.2 Ac~(KO) EGFP P_(tight)-dnapol Bacmid的获得及PCR鉴定 | 第35页 |
| 2.7.3 Ac~(KO) EGFP P_(tight)-dnapol Bacmid和Ac EGFP Bacmid转染Sf9细胞及观察 | 第35页 |
| 2.8 Ac~(KO) P_(WSSV ie1)-rtTA~2 EGFP P_(tight)-dntapol Bacmid的构建及诱导复制观察 | 第35-37页 |
| 2.8.1 Ac~(KO) P_(WSSV ie1)-rtTA~2 Bacmid的构建 | 第35-37页 |
| 2.8.2 Ac~(KO) P_(WSSV ie1)-rtTA~2 EGFP P_(tight)-dnapol Bacmid的获得及PCR检测 | 第37页 |
| 2.8.3 Ac~(KO) P_(WSSV ie1)-rtTA~2 EGFP P_(tight)-dnapol Bacmid和Ac EGFP Bacmid转染Sf9细胞及观察 | 第37页 |
| 2.9 Ac~(KO) P_(WSSV ie1)-rtTA~2 EGFP P_(tight)-dnapol(chi locus)Bacmid的构建及诱导复制观察 | 第37-39页 |
| 2.9.1 Ac~(KO) P_(WSSV ie1)-rtTA~2 EGFP P_(tight)-dnapol(chi locus)Bacmid的构建 | 第37-39页 |
| 2.9.2 Ac~(KO) P_(WSSV ie1)-rtTA~2 EGFP P_(tight)-dnapol(chi locus)Bacmid和Ac EGFPBacmid转染Sf9细胞及观察 | 第39页 |
| 2.10 Ac~(KO) P_(CMV)-rtTA~2 EGFP P_(tight)-dnapol Bacmid的构建及诱导复制观察 | 第39-41页 |
| 2.10.1 Ac~(KO) P_(CMV)-rtTA~2 Bacmid的构建 | 第39-40页 |
| 2.10.2 Ac~(KO) P_(CMV)-rtTA~2 EGFP P_(tight)-dnapol Bacmid的获得及PCR检测 | 第40-41页 |
| 2.10.3 Ac~(KO) P_(CMV)-rtTA~2 EGFP P_(tight)-dnapol Bacmid和Ac EGFP Bacmid转染Sf9细胞及观察 | 第41页 |
| 2.11 Ac~(KO) P_(CMV)-rtTA~2 EGFP P_(tight)-dnapol-tTS Bacmid的构建及诱导复制观察 | 第41-43页 |
| 2.11.1 Ac~(KO) P_(CMV)-rtTA~2 EGFP P_(tight)-dnapol-tTS Bacmid的构建 | 第41-43页 |
| 2.11.2 Ac~(KO) P_(CMV)-rtTA~2 EGFP P_(tight)-dnapol-tTS Bacmid和Ac EGFP Bacmid转染Sf9细胞及观察 | 第43页 |
| 2.12 重组病毒Ac~(KO) P_(CMV)-rtTA~2 EGFP P_(tight)-dnapol-tTS的感染实验 | 第43-44页 |
| 2.13 dnapol突变型重组Bacmid的构建、诱导复制观察及半定量实验 | 第44-47页 |
| 2.13.1 dnapol突变型供体质粒pFastBac Dual-EGFP-P_(tight)-dnapol~m的构建 | 第44-46页 |
| 2.13.2 dnapol突变型重组Bacmid构建及PCR鉴定 | 第46-47页 |
| 2.13.3 dnapol突变型重组Bacmid及Ac EGFP Bacmid转染Sf9细胞及观察 | 第47页 |
| 2.13.4 重组Bacmid上清感染实验及细胞DNA的PCR分析 | 第47页 |
| 2.13.5 Ac~(KO) P_(CMV)-rtTA~2 EGFP P_(tight)-dnapol~m Bacmid诱导复制的半定量分析 | 第47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-65页 |
| 3.1 dnapol的功能验证 | 第47-50页 |
| 3.1.1 Ac~(KO) Bacmid的PCR鉴定 | 第47-48页 |
| 3.1.2 pFastBac Dual-P_(IE1)-EGFP-GUS的酶切鉴定 | 第48页 |
| 3.1.3 Ac~(KO)EGFP Bacmid的PCR鉴定 | 第48-49页 |
| 3.1.4 Ac EGFP Bacmid的PCR鉴定 | 第49页 |
| 3.1.5 Ac~(KO) EGFP Bacmid和Ac EGFP Bacmid转染Sf9细胞分析 | 第49-50页 |
| 3.2 Ac~(KO) EGFP P_(tight)-dnapol Bacmid的复制情况分析 | 第50-52页 |
| 3.2.1 pFastBac Dual-EGFP-P_(tight)-dnapol的酶切鉴定 | 第50页 |
| 3.2.2 Ac~(KO)EGFP P_(tight)-dnapol Bacmid的PCR鉴定 | 第50-51页 |
| 3.2.3 Ac~(KO) EGFP P_(tight)-dnapol Bacmid和Ac EGFP Bacmid转染Sf9细胞分析 | 第51-52页 |
| 3.3 Ac~(KO) P_(WSSV ie1)-rtTA~2 EGFP P_(tight)-dnapol Bacmid的诱导复制情况分析 | 第52-54页 |
| 3.3.1 Ac~(KO) P_(WSSV ie1)-rtTA~2 Bacmid的PCR鉴定 | 第52页 |
| 3.3.2 Ac~(KO) P_(WSSV ie1)-rtTA~2 EGFP P_(tight)-dnapol Bacmid的PCR鉴定 | 第52-53页 |
| 3.3.3 Ac~(KO) P_(WSSV ie1)-rtTA~2 EGFP P_(tight)-dnapol Bacmid和Ac EGFP Bacmid转染Sf9细胞分析 | 第53-54页 |
| 3.4 Ac~(KO) P_(WSSV ie1)-rtTA~2 EGFP P_(tight)-dnapol(chi locus)Bacmid的诱导复制情况分析 | 第54-56页 |
| 3.4.1 Ac~(KO) P_(WSSV ie1)-rtTA~2 EGFP P_(tight)-dnapol(chi locus)Bacmid的PCR检测 | 第54-55页 |
| 3.4.2 Ac~(KO) P_(WSSV ie1)-rtTA~2 EGFP P_(tight)-dnapol(chi locus)Bacmid和Ac EGFPBacmid转染Sf9细胞分析 | 第55-56页 |
| 3.5 Ac~(KO) P_(CMV)-rtTA~2 EGFP P_(tight)-dnapol Bacmid的诱导复制情况分析 | 第56-58页 |
| 3.5.1 Ac~(KO) P(CMV)-rtTA~2 Bacmid的PCR鉴定 | 第56-57页 |
| 3.5.2 Ac~(KO) P_(CMV)-rtTA~2 EGFP P_(tight)-dnapol Bacmid的PCR鉴定 | 第57页 |
| 3.5.3 Ac~(KO) P_(CMV)-rtTA~2 EGFP P_(tight)-dnapol Bacmid和Ac EGFP Bacmid转染Sf9细胞分析 | 第57-58页 |
| 3.6 Ac~(KO) P_(CMV)-rtTA~2 EGFP P_(tight)-dnapol-tTS Bacmid的诱导复制情况分析 | 第58-60页 |
| 3.6.1 pFastBac Dual-EGFP-P_(tight)-dnapol-tTS的酶切检测 | 第58-59页 |
| 3.6.2 Ac~(KO) P_(CMV)-rtTA~2 EGFP P_(tight)-dnapol-tTS Bacmid的PCR鉴定 | 第59页 |
| 3.6.3 Ac~(KO) P_(CMV)-rtTA~2 EGFP P_(tight)-dnapol-tTS Bacmid和Ac EGFP Bacmid转染Sf9细胞分析 | 第59-60页 |
| 3.7 Ac~(KO) P_(CMV)-rtTA~2 EGFP P_(tight)-dnapol-tTS的感染实验 | 第60-61页 |
| 3.8 dnapol突变型重组Bacmid的诱导复制情况分析 | 第61-65页 |
| 3.8.1 pFastBac Dual-EGFP-P_(tight)-dnapol~m的酶切检测 | 第61-62页 |
| 3.8.2 dnapol突变型重组Bacmid的PCR鉴定 | 第62-63页 |
| 3.8.3 dnapol突变型重组Bacmid及Ac EGFP Bacmid转染Sf9细胞分析 | 第63页 |
| 3.8.4 dnapol突变型重组Bacmid的dnapol位点回复野生型情况分析 | 第63-64页 |
| 3.8.5 Ac~(KO) P_(CMV)-rtTA~2 EGFP P_(tight)-dnapol~m Bacmid诱导复制的半定量分析 | 第64-65页 |
| 4 讨论 | 第65-68页 |
| 5 总结与展望 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
