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对虾VEGF信号通路在WSSV感染过程中的功能研究

摘要第5-7页
Abstract第7-8页
第一章 文献综述第12-24页
    1.1 对虾的主要病害及其免疫防御第12-15页
        1.1.1 对虾的主要病害概述第12-14页
        1.1.2 对虾的免疫防御概述第14-15页
    1.2 经典的先天免疫信号通路第15-19页
        1.2.1 Toll信号通路第15-17页
        1.2.2 IMD信号通路第17-18页
        1.2.3 JAK-STAT信号通路第18-19页
    1.3 VEGF信号通路第19-22页
        1.3.1 VEGF信号通路的结构与功能第19-21页
        1.3.2 VEGF信号通路与其他信号通路之间的调控作用第21页
        1.3.3 甲壳动物VEGF信号通路的研究第21-22页
    1.4 本研究目的及意义第22-24页
第二章 凡纳滨对虾VEGFs基因在WSSV感染过程中的作用第24-74页
    2.1 材料与方法第24-46页
        2.1.1 实验材料及组织取样第24-25页
        2.1.2 主要试剂及菌株第25页
        2.1.3 所用引物第25-28页
        2.1.4 总RNA提取及第一链cDNA合成第28-29页
        2.1.5 VEGFs基因克隆第29-33页
        2.1.6 VEGFs基因序列分析第33-35页
        2.1.7 半定量PCR第35-36页
        2.1.8 实时荧光定量PCR第36-39页
        2.1.9 双链RNA合成及最佳干扰剂量筛选第39-43页
        2.1.10 凡纳滨对虾基因组DNA提取第43-44页
        2.1.11 WSSV拷贝数检测第44-46页
    2.2 结果第46-69页
        2.2.1 ORF序列及序列特征第46-55页
        2.2.2 VEGFs基因组织表达分布第55-57页
        2.2.3 WSSV感染对虾后VEGF基因的时序表达谱第57-60页
        2.2.4 VEGFs基因干扰的dsRNA最佳剂量筛选第60-62页
        2.2.5 VEGFs基因的沉默对WSSV感染引起的对虾死亡率的影响第62-66页
        2.2.6 VEGFs基因的沉默对对虾体内WSSV拷贝数的影响第66-67页
        2.2.7 VEGFs基因的沉默对下游信号通路基因表达的调控第67-69页
    2.3 讨论第69-74页
第三章 凡纳滨对虾VEGFRs基因在WSSV感染过程中的作用第74-112页
    3.1 材料与方法第74-93页
        3.1.1 实验材料及组织取样第74-75页
        3.1.2 主要试剂及菌株第75-76页
        3.1.3 所用引物第76-79页
        3.1.4 总RNA提取及第一链cDNA合成第79-81页
        3.1.5 VEGFRs基因克隆第81-85页
        3.1.6 VEGFRs基因序列分析第85-87页
        3.1.7 实时荧光定量PCR第87-88页
        3.1.8 双链RNA合成及最佳剂量筛选第88-92页
        3.1.9 基因组DNA提取第92-93页
        3.1.10 WSSV拷贝数检测第93页
    3.2 结果第93-108页
        3.2.1 ORF序列及序列特征第93-101页
        3.2.2 VEGFRs基因组织表达分布第101-102页
        3.2.3 WSSV感染对虾后基因的时序表达谱第102-103页
        3.2.4 VEGFRs基因干扰的dsRNA最佳剂量筛选第103-104页
        3.2.5 VEGFRs基因的沉默对WSSV感染对虾的影响第104-106页
        3.2.6 VEGFRs基因的沉默对下游信号通路基因表达的调控第106-108页
    3.3 讨论第108-112页
第四章 凡纳滨对虾VEGFs与VEGFRs相互作用分析第112-130页
    4.1 材料与方法第112-121页
        4.1.1 实验材料及组织取样第112页
        4.1.2 主要试剂及菌株第112-113页
        4.1.3 所用引物第113-116页
        4.1.4 融合蛋白表达及纯化第116-117页
        4.1.5 重组蛋白的注射第117-118页
        4.1.6 实时荧光定量PCR第118页
        4.1.7 酵母双杂交实验第118-121页
    4.2 结果第121-128页
        4.2.1 VEGFs基因的沉默对受体基因表达的影响第121-123页
        4.2.2 注射VEGFs重组蛋白对VEGFR基因表达的影响第123-124页
        4.2.3 VEGFs与VEGFRs的相互作用分析第124-128页
    4.3 讨论第128-130页
结论第130-132页
参考文献第132-152页
致谢第152-154页
作者简历第154-156页
攻读博士学位期间发表的学术论文与研究成果第156页

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