摘要 | 第5-7页 |
Abstract | 第7-8页 |
第一章 文献综述 | 第12-24页 |
1.1 对虾的主要病害及其免疫防御 | 第12-15页 |
1.1.1 对虾的主要病害概述 | 第12-14页 |
1.1.2 对虾的免疫防御概述 | 第14-15页 |
1.2 经典的先天免疫信号通路 | 第15-19页 |
1.2.1 Toll信号通路 | 第15-17页 |
1.2.2 IMD信号通路 | 第17-18页 |
1.2.3 JAK-STAT信号通路 | 第18-19页 |
1.3 VEGF信号通路 | 第19-22页 |
1.3.1 VEGF信号通路的结构与功能 | 第19-21页 |
1.3.2 VEGF信号通路与其他信号通路之间的调控作用 | 第21页 |
1.3.3 甲壳动物VEGF信号通路的研究 | 第21-22页 |
1.4 本研究目的及意义 | 第22-24页 |
第二章 凡纳滨对虾VEGFs基因在WSSV感染过程中的作用 | 第24-74页 |
2.1 材料与方法 | 第24-46页 |
2.1.1 实验材料及组织取样 | 第24-25页 |
2.1.2 主要试剂及菌株 | 第25页 |
2.1.3 所用引物 | 第25-28页 |
2.1.4 总RNA提取及第一链cDNA合成 | 第28-29页 |
2.1.5 VEGFs基因克隆 | 第29-33页 |
2.1.6 VEGFs基因序列分析 | 第33-35页 |
2.1.7 半定量PCR | 第35-36页 |
2.1.8 实时荧光定量PCR | 第36-39页 |
2.1.9 双链RNA合成及最佳干扰剂量筛选 | 第39-43页 |
2.1.10 凡纳滨对虾基因组DNA提取 | 第43-44页 |
2.1.11 WSSV拷贝数检测 | 第44-46页 |
2.2 结果 | 第46-69页 |
2.2.1 ORF序列及序列特征 | 第46-55页 |
2.2.2 VEGFs基因组织表达分布 | 第55-57页 |
2.2.3 WSSV感染对虾后VEGF基因的时序表达谱 | 第57-60页 |
2.2.4 VEGFs基因干扰的dsRNA最佳剂量筛选 | 第60-62页 |
2.2.5 VEGFs基因的沉默对WSSV感染引起的对虾死亡率的影响 | 第62-66页 |
2.2.6 VEGFs基因的沉默对对虾体内WSSV拷贝数的影响 | 第66-67页 |
2.2.7 VEGFs基因的沉默对下游信号通路基因表达的调控 | 第67-69页 |
2.3 讨论 | 第69-74页 |
第三章 凡纳滨对虾VEGFRs基因在WSSV感染过程中的作用 | 第74-112页 |
3.1 材料与方法 | 第74-93页 |
3.1.1 实验材料及组织取样 | 第74-75页 |
3.1.2 主要试剂及菌株 | 第75-76页 |
3.1.3 所用引物 | 第76-79页 |
3.1.4 总RNA提取及第一链cDNA合成 | 第79-81页 |
3.1.5 VEGFRs基因克隆 | 第81-85页 |
3.1.6 VEGFRs基因序列分析 | 第85-87页 |
3.1.7 实时荧光定量PCR | 第87-88页 |
3.1.8 双链RNA合成及最佳剂量筛选 | 第88-92页 |
3.1.9 基因组DNA提取 | 第92-93页 |
3.1.10 WSSV拷贝数检测 | 第93页 |
3.2 结果 | 第93-108页 |
3.2.1 ORF序列及序列特征 | 第93-101页 |
3.2.2 VEGFRs基因组织表达分布 | 第101-102页 |
3.2.3 WSSV感染对虾后基因的时序表达谱 | 第102-103页 |
3.2.4 VEGFRs基因干扰的dsRNA最佳剂量筛选 | 第103-104页 |
3.2.5 VEGFRs基因的沉默对WSSV感染对虾的影响 | 第104-106页 |
3.2.6 VEGFRs基因的沉默对下游信号通路基因表达的调控 | 第106-108页 |
3.3 讨论 | 第108-112页 |
第四章 凡纳滨对虾VEGFs与VEGFRs相互作用分析 | 第112-130页 |
4.1 材料与方法 | 第112-121页 |
4.1.1 实验材料及组织取样 | 第112页 |
4.1.2 主要试剂及菌株 | 第112-113页 |
4.1.3 所用引物 | 第113-116页 |
4.1.4 融合蛋白表达及纯化 | 第116-117页 |
4.1.5 重组蛋白的注射 | 第117-118页 |
4.1.6 实时荧光定量PCR | 第118页 |
4.1.7 酵母双杂交实验 | 第118-121页 |
4.2 结果 | 第121-128页 |
4.2.1 VEGFs基因的沉默对受体基因表达的影响 | 第121-123页 |
4.2.2 注射VEGFs重组蛋白对VEGFR基因表达的影响 | 第123-124页 |
4.2.3 VEGFs与VEGFRs的相互作用分析 | 第124-128页 |
4.3 讨论 | 第128-130页 |
结论 | 第130-132页 |
参考文献 | 第132-152页 |
致谢 | 第152-154页 |
作者简历 | 第154-156页 |
攻读博士学位期间发表的学术论文与研究成果 | 第156页 |