| 致谢 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 引言 | 第10-17页 |
| 1.1 双组分信号转导系统 | 第10-12页 |
| 1.1.1 组氨酸激酶结构特点 | 第10页 |
| 1.1.2 反应调节蛋白结构特点 | 第10-12页 |
| 1.1.3 双组份信号转导系统信号转导机制 | 第12页 |
| 1.1.4 双组份信号转导系统研究意义 | 第12页 |
| 1.2 核磁共振波谱学 | 第12-16页 |
| 1.2.1 核磁共振基本原理 | 第13页 |
| 1.2.2 核磁共振检测参数 | 第13-15页 |
| 1.2.3 ~(19)F NMR | 第15页 |
| 1.2.4 ~1H-~(15)N HSQC | 第15页 |
| 1.2.5 CPMG Relaxation Dispersion | 第15-16页 |
| 1.3 小结 | 第16-17页 |
| 2 反应调节蛋白RR468及其突变体的表达与纯化 | 第17-27页 |
| 2.1 前言 | 第17-18页 |
| 2.2 材料与方法 | 第18-23页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第18-19页 |
| 2.2.2 RR468及其突变体的质粒构建 | 第19-21页 |
| 2.2.3 RR468的表达 | 第21-22页 |
| 2.2.4 RR468的纯化 | 第22-23页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第23-26页 |
| 2.3.1 RR468表达情况分析 | 第23页 |
| 2.3.2 QFF离子交换层析纯化结果 | 第23-25页 |
| 2.3.3 凝胶过滤层析结果 | 第25-26页 |
| 2.3.4 脱盐柱层析结果 | 第26页 |
| 2.4 小结 | 第26-27页 |
| 3 影响RR468磷酸化和去磷酸化的关键位点D+2和T+2的研究 | 第27-39页 |
| 3.1 前言 | 第27-28页 |
| 3.2 实验与方法 | 第28-31页 |
| 3.2.0 HK853~(DHp)结构域的表达与纯化 | 第28-29页 |
| 3.2.1 磷酸化与去磷酸化功能实验 | 第29-30页 |
| 3.2.2 核磁共振实验实验 | 第30-31页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第31-37页 |
| 3.3.1 M55A及K85E与野生型RR468磷酸化和自去磷酸化速率比较 | 第31-33页 |
| 3.3.2 M55A及K85E与HK853的DHp结构域的相互作用 | 第33-34页 |
| 3.3.3 M55A及K85E对于RR468三个关键loop区的动力学性质的影响 | 第34-36页 |
| 3.3.4 M55A及K85E对于蛋白结构的影响 | 第36-37页 |
| 3.4 小结 | 第37-39页 |
| 4 D+3位点参与调控RR468磷酸化作用机制的研究 | 第39-55页 |
| 4.1 前言 | 第39-40页 |
| 4.2 实验与方法 | 第40-41页 |
| 4.2.1 M56相关突变体磷酸化功能实验 | 第40页 |
| 4.2.2 M56A圆二色谱光实验 | 第40-41页 |
| 4.2.3 M56相关突变体~1H-~(15)N HSQC、1D ~(19)F NMR以及CPMG实验 | 第41页 |
| 4.2.4 M56A主链归属及结构解析NMR实验 | 第41页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第41-54页 |
| 4.3.1 突变体M56A失去磷酸化功能 | 第41-43页 |
| 4.3.2 突变体M56A主链信号归属与核磁结构解析 | 第43-45页 |
| 4.3.3 M56A影响蛋白与Mg~(2+)的结合 | 第45-48页 |
| 4.3.4 M56A对蛋白动力学性质的影响 | 第48页 |
| 4.3.5 D+3残基侧链长度影响其磷酸化功能 | 第48-51页 |
| 4.3.6 D+3位点形成疏水口袋利于稳定蛋白结构 | 第51-54页 |
| 4.4 小结 | 第54-55页 |
| 5 总结与展望 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 附录 | 第62-63页 |
| 作者简介及在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第63页 |
