| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 1 绪论 | 第9-16页 |
| 1.1 七鳃鳗免疫系统 | 第9页 |
| 1.2 外泌体 | 第9-15页 |
| 1.2.1 外泌体的组成和分泌 | 第10-11页 |
| 1.2.2 外泌体的功能 | 第11-14页 |
| 1.2.3 外泌体的免疫治疗 | 第14页 |
| 1.2.4 外泌体的分离鉴定 | 第14-15页 |
| 1.3 本研究的意义 | 第15-16页 |
| 2 七鳃鳗白细胞来源外泌体提取方法的建立 | 第16-24页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第16页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第16页 |
| 2.1.2 仪器设备 | 第16页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第16页 |
| 2.2 实验方法 | 第16-20页 |
| 2.2.1 七鳃鳗白细胞的分离 | 第16-17页 |
| 2.2.2 七鳃鳗白细胞的培养 | 第17页 |
| 2.2.3 七鳃鳗白细胞来源外泌体的分离方法 | 第17-18页 |
| 2.2.4 考马斯亮蓝对蛋白样品定量 | 第18-19页 |
| 2.2.5 SDS-PAGE | 第19页 |
| 2.2.6 染色 | 第19-20页 |
| 2.3 实验结果 | 第20-22页 |
| 2.4 讨论 | 第22-24页 |
| 3 分离得到的外泌体形态鉴定 | 第24-27页 |
| 3.1 实验材料与试剂 | 第24页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第24页 |
| 3.1.2 仪器设备 | 第24页 |
| 3.1.3 药品及试剂 | 第24页 |
| 3.2 实验方法 | 第24页 |
| 3.2.1 动态光散射技术检测外泌体粒径分布 | 第24页 |
| 3.2.2 电镜观察外泌体的形态 | 第24页 |
| 3.3 实验结果 | 第24-26页 |
| 3.3.1 外泌体动态光散射结果 | 第24-25页 |
| 3.3.2 外泌体电镜观察结果 | 第25-26页 |
| 3.4 讨论 | 第26-27页 |
| 4 七鳃鳗白细胞来源外泌体标记分子的克隆与检测 | 第27-52页 |
| 4.1 实验材料与试剂 | 第27页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第27页 |
| 4.1.2 仪器设备 | 第27页 |
| 4.1.3 药品试剂 | 第27页 |
| 4.2 实验方法 | 第27-36页 |
| 4.2.1 引物设计 | 第27-28页 |
| 4.2.2 提取总RNA | 第28-29页 |
| 4.2.3 总RNA反转录为cDNA | 第29-30页 |
| 4.2.4 cDNA 3’末端快速扩增 | 第30-31页 |
| 4.2.5 琼脂糖凝胶电泳 | 第31页 |
| 4.2.6 胶回收 | 第31-32页 |
| 4.2.7 cDNA 5’末端快速扩增 | 第32-33页 |
| 4.2.8 标记基因全长扩增 | 第33-34页 |
| 4.2.9 目的片段与载体的连接、转化 | 第34页 |
| 4.2.10 标记基因生物信息学分析 | 第34-35页 |
| 4.2.11 Western Blot检测 | 第35-36页 |
| 4.3 实验结果 | 第36-50页 |
| 4.3.1 白细胞来源外泌体标记分子的基因克隆 | 第36-39页 |
| 4.3.2 生物信息学分析 | 第39-48页 |
| 4.3.3 白细胞来源外泌体标记蛋白Western Blot检测 | 第48-50页 |
| 4.4 讨论 | 第50-52页 |
| 5 外泌体的蛋白质组分析 | 第52-67页 |
| 5.1 实验材料与试剂 | 第52页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第52页 |
| 5.1.2 仪器设备 | 第52页 |
| 5.1.3 药品试剂 | 第52页 |
| 5.2 实验方法 | 第52-55页 |
| 5.2.1 SDS-PAGE | 第52-53页 |
| 5.2.2 胶内酶解 | 第53页 |
| 5.2.3 LC-MS质谱分析 | 第53页 |
| 5.2.4 质谱数据分析 | 第53页 |
| 5.2.5 七鳃鳗L-TGF-β 基因引物设计 | 第53页 |
| 5.2.6 七鳃鳗L-TGF-β 基因克隆 | 第53-54页 |
| 5.2.7 L-TGF-β 分子生物信息学分析 | 第54-55页 |
| 5.3 实验结果 | 第55-62页 |
| 5.3.1 考马斯亮蓝染色 | 第55页 |
| 5.3.2 七鳃鳗白细胞来源外泌体质谱结果 | 第55-58页 |
| 5.3.3 七鳃鳗白细胞来源外泌体中L-TGF-β 基因的克隆 | 第58-59页 |
| 5.3.4 七鳃鳗L-TGF-β 分子的生物信息学分析与预测 | 第59-62页 |
| 5.4 讨论 | 第62-67页 |
| 5.4.1 外泌体标记分子 | 第63-65页 |
| 5.4.2 免疫调控相关蛋白 | 第65-67页 |
| 结论 | 第67-68页 |
| 本论文的创新点 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
