| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-6页 |
| 缩略语表 | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 第一章 综述 | 第11-21页 |
| 1.贝类免疫研究概述 | 第11-14页 |
| ·贝类的细胞防御机制 | 第11-12页 |
| ·贝类的体液防御机制 | 第12-14页 |
| 2.超氧化物歧化酶基因研究现状 | 第14-19页 |
| ·SOD的发现 | 第14-15页 |
| ·SOD的种类和结构 | 第15-16页 |
| ·SOD的理化性质和作用机理 | 第16-17页 |
| ·SOD的活性测定及影响因素 | 第17-18页 |
| ·氧化酶对乙醇损伤肝细胞的保护作用 | 第18-19页 |
| ·SOD的应用 | 第19页 |
| 3.本研究的意义 | 第19-21页 |
| 第二章 利用E.coli表达系统制备褶纹冠蚌重组CuZn-SOD蛋白 | 第21-37页 |
| ·材料与方法 | 第21-23页 |
| ·实验材料 | 第21-22页 |
| ·菌株和质粒 | 第22页 |
| ·酶、引物 | 第22页 |
| ·试剂与仪器设备 | 第22页 |
| ·E.coli感受态细胞的制备 | 第22-23页 |
| ·试验方法 | 第23-29页 |
| ·RNA的提取 | 第23-24页 |
| ·cDNA的合成 | 第24-25页 |
| ·CpSOD基因的扩增 | 第25页 |
| ·SOD-T亚克隆载体的构建 | 第25页 |
| ·测序及序列分析 | 第25页 |
| ·表达载体的构建与鉴定 | 第25-28页 |
| ·重组SOD蛋白的诱导表达和SDS-PAGE分析 | 第28-29页 |
| ·可溶性重组CpSOD蛋白诱导表达条件的优化 | 第29页 |
| ·结果 | 第29-35页 |
| ·总RNA的提取 | 第29-30页 |
| ·RT-PCR | 第30-31页 |
| ·SOD-T载体的菌落PCR及酶切鉴定 | 第31-32页 |
| ·重组rCpSOD表达载体的构建 | 第32-33页 |
| ·重组rCpSOD蛋白的诱导表达和SDS-PAGE分析 | 第33-34页 |
| ·可溶rCpSOD蛋白诱导表达条件的优化 | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第35-37页 |
| 第三章 褶纹冠蚌重组SOD蛋白的纯化和活性测定 | 第37-53页 |
| ·材料与方法 | 第38-39页 |
| ·主要仪器设备 | 第38页 |
| ·菌株和试剂 | 第38-39页 |
| ·实验方法 | 第39-44页 |
| ·rCpSOD蛋白的表达纯化及含量测定 | 第39-41页 |
| ·rCpSOD酶活性测定 | 第41页 |
| ·温度、pH、变性剂对纯化好的天然形式可溶rCpSOD蛋白活性的影响 | 第41-42页 |
| ·黑鼠多克隆抗体的制备 | 第42页 |
| ·ELISA测定血清抗体效价 | 第42-43页 |
| ·rCpSOD蛋白的Western免疫验证 | 第43-44页 |
| ·结果 | 第44-50页 |
| ·rCpSOD蛋白的纯化 | 第44-45页 |
| ·rCpSOD蛋白浓度测定 | 第45-46页 |
| ·rCpSOD蛋白酶活性测定 | 第46-47页 |
| ·温度、pH和变性剂可溶rCpSOD蛋白酶活性的影响 | 第47-48页 |
| ·ELISA测定血清抗体效价 | 第48-49页 |
| ·Western验证 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-53页 |
| 第四章 可溶rCpSOD蛋白对人L02肝细胞的保护作用研究 | 第53-59页 |
| ·实验试剂与仪器 | 第53-54页 |
| ·实验方法 | 第54-55页 |
| ·人L02肝细胞的复苏和培养 | 第54页 |
| ·乙醇损伤L02肝细胞模型的建立 | 第54页 |
| ·rCpSOD对乙醇所致人L02肝细胞氧化损伤的保护作用 | 第54-55页 |
| ·实验结果 | 第55-57页 |
| ·乙醇损伤L02细胞半致死浓度(IC50)的确定 | 第55-56页 |
| ·IC50的乙醇浓度在不同时刻对L02细胞损伤情况 | 第56页 |
| ·rCpSOD蛋白对乙醇所致人L02肝细胞氧化损伤的保护作用 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| 结论 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 附录 | 第66-68页 |
| 附录1 实验室常规培养基及分子生物学试剂 | 第66-67页 |
| 附录2 常规免疫学检测试剂 | 第67-68页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第68页 |
