| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-20页 |
| 1.1 木材形成分子机制研究进展 | 第12-15页 |
| 1.1.1 木材的显微构造 | 第12-13页 |
| 1.1.2 木材形成的分子机制研究进展 | 第13-15页 |
| 1.1.2.1 纤维素生物合成的相关酶基因 | 第13-14页 |
| 1.1.2.2 木质素生物合成途径的酶基因 | 第14页 |
| 1.1.2.3 参与木材形成的主要转录调控因子 | 第14-15页 |
| 1.2 OFP基因家族研究进展 | 第15-17页 |
| 1.2.1 OFP结构及其分类 | 第15-16页 |
| 1.2.2 OFP的功能研究 | 第16页 |
| 1.2.3 OFP蛋白与TALE蛋白互作 | 第16-17页 |
| 1.3 光皮桦研究进展 | 第17-18页 |
| 1.3.1 常规遗传改良现状 | 第17-18页 |
| 1.3.2 分子生物学相关研究 | 第18页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第18-20页 |
| 第二章 光皮桦BlOFPs基因克隆及序列分析 | 第20-34页 |
| 2.1 材料与方法 | 第20-27页 |
| 2.1.1 材料 | 第20页 |
| 2.1.2 实验器皿处理 | 第20页 |
| 2.1.3 总RNA的提取 | 第20-21页 |
| 2.1.4 RNA的检测 | 第21-22页 |
| 2.1.5 基因验证与表达分析 | 第22-27页 |
| 2.1.5.1 RACE cDNA第一链的合成 | 第22页 |
| 2.1.5.2 目的基因RACE | 第22-23页 |
| 2.1.5.3 目的基因片段的回收 | 第23-24页 |
| 2.1.5.4 CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞 | 第24-25页 |
| 2.1.5.5 目的基因连接转化 | 第25页 |
| 2.1.5.6 全长cDNA的PCR验证 | 第25-27页 |
| 2.1.6 BlOFPs生物信息学分析 | 第27页 |
| 2.2 结果分析 | 第27-32页 |
| 2.2.1 BlOFPs全长cDNA序列分析 | 第27页 |
| 2.2.2 BlOFPs氨基酸序列分析 | 第27-28页 |
| 2.2.3 OFPs基因家族进化树分析 | 第28-32页 |
| 2.3 讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 光皮桦BlOFPs基因表达分析 | 第34-47页 |
| 3.1 材料与方法 | 第34-39页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第34页 |
| 3.1.2 机械胁迫处理 | 第34页 |
| 3.1.3 切片制作、染色和观察 | 第34-37页 |
| 3.1.3.1 茎段切片制作、染色和观察 | 第34-36页 |
| 3.1.3.2 应拉木切片制作、观察和纤维形态观测 | 第36-37页 |
| 3.1.4 总RNA的提取与检测 | 第37页 |
| 3.1.5 cDNA的合成 | 第37-38页 |
| 3.1.6 定量PCR表达分析 | 第38-39页 |
| 3.2 结果分析 | 第39-45页 |
| 3.2.1 显微特征 | 第39-42页 |
| 3.2.1.1 茎段解剖分析 | 第39页 |
| 3.2.1.2 应拉木和对应木的显微特征 | 第39-42页 |
| 3.2.2 不同器官中BlOFPs的表达差异 | 第42-44页 |
| 3.2.3 机械胁迫对BlOFPs的表达影响 | 第44-45页 |
| 3.3 讨论 | 第45-47页 |
| 第四章 光皮桦茎段酵母双杂交均一化cDNA文库的构建 | 第47-57页 |
| 4.1 材料与方法 | 第47-54页 |
| 4.1.1 植物材料及试剂 | 第47-48页 |
| 4.1.2 木质部RNA提取、检测及纯化 | 第48页 |
| 4.1.3 全长cDNA合成 | 第48-49页 |
| 4.1.4 cDNA均一化及均一化测定 | 第49-51页 |
| 4.1.5 分离法纯化cDNA | 第51页 |
| 4.1.6 ds cDNA与载体的连接和初级文库的转化 | 第51-52页 |
| 4.1.7 初级文库的保存及文库扩增和验证 | 第52-53页 |
| 4.1.7.1 初级文库的扩增 | 第52页 |
| 4.1.7.2 初级文库的保存 | 第52页 |
| 4.1.7.3 扩增文库质粒提取 | 第52-53页 |
| 4.1.7.4 质粒PCR检测插入片段 | 第53页 |
| 4.1.8 Y187酵母文库构建 | 第53-54页 |
| 4.1.8.1 制备Y187酵母感受态细胞 | 第53页 |
| 4.1.8.2 酵母文库转化 | 第53-54页 |
| 4.1.8.3 收集文库转化酵母细胞 | 第54页 |
| 4.2 结果分析 | 第54-56页 |
| 4.2.1 光皮桦茎段总RNA的提取、检测及纯化 | 第54-55页 |
| 4.2.2 光皮桦双链cDNA均一化效率验证 | 第55-56页 |
| 4.2.3 文库库容和插入片段分析 | 第56页 |
| 4.3 讨论 | 第56-57页 |
| 第五章 光皮桦BlOFPs的互作蛋白分析 | 第57-69页 |
| 5.1 材料与方法 | 第57-64页 |
| 5.1.1 材料 | 第57页 |
| 5.1.2 培养基配制 | 第57页 |
| 5.1.3 酵母载体构建 | 第57-59页 |
| 5.1.3.1 同源重组法构建表达载体 | 第58页 |
| 5.1.3.2 Gateway法构建表达载体 | 第58-59页 |
| 5.1.4 酵母感受态细胞制备与转化 | 第59-60页 |
| 5.1.4.1 酵母菌液的保存与复苏 | 第59-60页 |
| 5.1.4.2 酵母感受态细胞的制备 | 第60页 |
| 5.1.4.3 酵母转化 | 第60页 |
| 5.1.5 自激活检测 | 第60-61页 |
| 5.1.6 酵母双杂交 | 第61页 |
| 5.1.7 酵母文库杂交 | 第61-64页 |
| 5.1.7.1 文库杂交步骤 | 第61-63页 |
| 5.1.7.2 阳性克隆质粒提取及转化 | 第63页 |
| 5.1.7.3 序列分析 | 第63-64页 |
| 5.2 结果分析 | 第64-68页 |
| 5.2.1 酵母表达载体构建及鉴定 | 第64页 |
| 5.2.2 酵母表达自激活检测 | 第64-65页 |
| 5.2.3 BlOFPs与BlBEL1-likes蛋白互作分析 | 第65-66页 |
| 5.2.4 酵母均一化文库杂交结果分析 | 第66-68页 |
| 5.3 结论 | 第68-69页 |
| 第六章 光皮桦BlOFPs基因的异源转化 | 第69-74页 |
| 6.1 材料与方法 | 第69-70页 |
| 6.1.1 植物材料和主要试剂 | 第69页 |
| 6.1.2 超表达载体构建 | 第69页 |
| 6.1.3 农杆菌转化 | 第69-70页 |
| 6.1.3.1 农杆菌电转感受态制备 | 第69-70页 |
| 6.1.3.2 农杆菌电转化 | 第70页 |
| 6.2 拟南芥遗传转化 | 第70-71页 |
| 6.2.1 拟南芥培养 | 第70页 |
| 6.2.2 浸润法转基因 | 第70-71页 |
| 6.2.3 拟南芥阳性植株筛选鉴定 | 第71页 |
| 6.2.3.1 阳性植株筛选 | 第71页 |
| 6.2.3.2 阳性植株表型观测 | 第71页 |
| 6.3 结果分析 | 第71-73页 |
| 6.3.1 转基因植株潮霉素筛选 | 第71页 |
| 6.3.2 转基因植株分子鉴定 | 第71页 |
| 6.3.3 农艺性状测定分析 | 第71-73页 |
| 6.4 讨论 | 第73-74页 |
| 结论与展望 | 第74-76页 |
| 7.1 主要研究成果 | 第74页 |
| 7.2 研究展望 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-87页 |
| 个人简介 | 第87页 |
| 论文发表情况 | 第87页 |
| 社会实践及学术交流活动 | 第87-88页 |
| 致谢 | 第88页 |
