| 摘要 | 第13-15页 |
| Abstract | 第15-17页 |
| 绪论 | 第18-31页 |
| 第一章 PDE5抑制剂抑制小胶质细胞活化的作用 | 第31-64页 |
| 第一节 概述 | 第31页 |
| 第二节 实验材料 | 第31-35页 |
| 1. 细胞株 | 第31-32页 |
| 2. 实验动物 | 第32页 |
| 3. 药品与试剂 | 第32-34页 |
| 4. 实验仪器 | 第34-35页 |
| 第三节 实验方法 | 第35-46页 |
| 1. 化合物的来源和配制 | 第35页 |
| 2. 小鼠小胶质细胞系N9的培养 | 第35页 |
| 3. 原代小胶质细胞分离、纯化和培养 | 第35-36页 |
| 4. 原代小胶质细胞的鉴定:免疫组化 | 第36-37页 |
| 5. 亚硝酸盐含量的测定 | 第37页 |
| 6. MTT法检测小胶质细胞的成活率 | 第37-38页 |
| 7. ELISA法检测小胶质细胞IL-1β和TNF-α释放 | 第38-39页 |
| 8. RT-PCR法考察小胶质细胞iNOS、IL-1β和TNF-α mRNA表达 | 第39-42页 |
| 9. Western-blot analysis(免疫印迹法) | 第42-45页 |
| 10. 人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的培养 | 第45页 |
| 11. 西地那非和优克那非对小胶质细胞活化导致神经元损伤的抑制作用 | 第45-46页 |
| 12. 统计学处理方法 | 第46页 |
| 第四节 实验结果 | 第46-60页 |
| 1. 西地那非和优克那非对N9小胶质细胞存活率的影响 | 第46-47页 |
| 2. 西地那非和优克那非对N9小胶质细胞基础NO释放的影响 | 第47页 |
| 3. 西地那非和优克那非对LPS激活的N9小胶质细胞NO释放的量效关系 | 第47-48页 |
| 4. 西地那非和优克那非对激活的N9小胶质细胞形态学改变的影响 | 第48-49页 |
| 5. 大鼠原代培养小胶质细胞的分离 | 第49-50页 |
| 6. 原代小胶质细胞纯度的鉴定:免疫细胞化学 | 第50-51页 |
| 7. 西地那非和优克那非对原代小胶质细胞存活率的影响 | 第51页 |
| 8. 西地那非和优克那非对原代小胶质细胞基础NO释放的影响 | 第51-52页 |
| 9. 西地那非和优克那非对LPS激活的原代小胶质细胞NO释放的量效关系 | 第52-53页 |
| 10. 西地那非和优克那非对LPS活化的N9细胞iNOS mRNA表达水平的影响 | 第53-54页 |
| 11. 西地那非和优克那非对LPS活化的N9细胞iNOS蛋白表达水平的影响 | 第54-56页 |
| 12. 西地那非和优克那非对LPS活化的N9细胞IL-1β和TNF-α炎症因子释放的影响 | 第56-57页 |
| 13.西地那非和优克那非对LPS活化的N9细胞IL-1β mRNA表达水平的影响 | 第57-58页 |
| 14. 西地那非和优克那非对LPS活化的N9细TNF-α mRNA表达水平的影响 | 第58-60页 |
| 15. 西地那非和优克那非对LPS活化的N9细胞条件培养液对神经元(SH-SY5Y)存活率的影响.. | 第60页 |
| 第五节 结论与讨论 | 第60-62页 |
| 小结 | 第62-64页 |
| 第二章 PDE5在LPS活化的小胶质细胞中的作用 | 第64-83页 |
| 第一节 概述 | 第64页 |
| 第二节 实验材料 | 第64-65页 |
| 1. 细胞株 | 第64页 |
| 2. 药品与试剂 | 第64-65页 |
| 3. 实验仪器 | 第65页 |
| 第三节 实验方法 | 第65-68页 |
| 1. 化合物的来源和配制 | 第65页 |
| 2. 小鼠小胶质细胞系N9的培养 | 第65页 |
| 3. iROS水平测定 | 第65-66页 |
| 4. RT-PCR法考察小胶质细胞PDE5 mRNA表达 | 第66-67页 |
| 5. Western-blot analysis(免疫印迹法) | 第67-68页 |
| 6. 激光共聚焦法检测N9小胶质细胞内NF-κB关键亚基p65蛋白核转位 | 第68页 |
| 7. 统计学处理方法 | 第68页 |
| 第四节 实验结果 | 第68-79页 |
| 1. Western-blot法考察LPS对N9小胶质细胞PDE5蛋白表达的影响 | 第68-69页 |
| 2. 西地那非和优克那非对N9小胶质细胞PDE5蛋白表达的影响 | 第69-70页 |
| 3. 西地那非和优克那非对LPS活化的N9小胶质细胞PDE5蛋白表达的影响 | 第70-72页 |
| 4. 西地那非对LPS激活的N9小胶质细胞PDE5 mRNA表达的影响 | 第72-73页 |
| 5. 抗氧化剂NAC、NADPH氧化酶抑制剂DPI和NF-κB抑制剂PDTC对LPS诱导N9小胶质细胞PDE蛋白表达的影响 | 第73-74页 |
| 6. 外源性给予H_2O_2对N9小胶质细胞PDE5表达的影响 | 第74页 |
| 7. 抗氧化剂NAC、NADPH氧化酶抑制剂DPI和NF-κB抑制剂PDTC对H202诱导N9小胶质细胞PDE蛋白表达的影响 | 第74-75页 |
| 8. TNF-α诱导N9小胶质细胞内ROS水平的量效关系 | 第75-76页 |
| 9. 抗氧化剂NAC、NADPH氧化酶抑制剂DPI和NF-κB抑制剂PDTC对TN F-α诱导N9小胶质细胞ROS水平的影响 | 第76-77页 |
| 10. TNF-α对N9小胶质细胞NF-κB亚基p65核转位的影响 | 第77页 |
| 11. TNF-α对N9小胶质细胞PDE5蛋白表达的影响 | 第77-78页 |
| 12. NADPH氧化酶抑制剂DPI和NF-κB抑制剂PDTC对TNF-α诱导N9小胶质细胞PDE5蛋白表达的影响 | 第78-79页 |
| 第五节 结论与讨论 | 第79-81页 |
| 小结 | 第81-83页 |
| 第三章 PDE5抑制剂通过抑制NADPH氧化酶所产生的活性氧而抑制小胶质细胞活化的MAPKs/NF-κ B通路 | 第83-116页 |
| 第一节 概述 | 第83页 |
| 第二节 实验材料与方法 | 第83-85页 |
| 1. 细胞株 | 第83页 |
| 2. 药品与试剂 | 第83-84页 |
| 3. 实验仪器 | 第84-85页 |
| 第三节 实验方法 | 第85-90页 |
| 1. 化合物的来源和配制 | 第85页 |
| 2. 小鼠小胶质细胞系N9的培养 | 第85页 |
| 3. DPPH·自由基的清除作用的测定 | 第85页 |
| 4. iROS水平测定 | 第85页 |
| 5. RT-PCR法考察LPS活化的小胶质细胞内NADPH亚基mRNA表达的变化 | 第85-88页 |
| 6. Western-blot analysis(免疫印迹法) | 第88-89页 |
| 7. 高内涵检测N9小胶质细胞内NF-κB关键亚基p65蛋白核转位 | 第89-90页 |
| 8. 激光共聚焦法检测N9小胶质细胞内NF-κB关键亚基p65蛋白核转位 | 第90页 |
| 9. 统计学处理方法 | 第90页 |
| 第四节 实验结果 | 第90-110页 |
| 1. 西地那非和优克那非对DPPH·自由基的清除作用 | 第90-91页 |
| 2. 西地那非和优克那非对LPS激活的小胶质细胞内ROS的影响 | 第91-92页 |
| 3. 西地那非对LPS激活的小胶质细胞NADPH氧化酶催化亚基gp91phox蛋白表达的影响 | 第92页 |
| 4. 优克那非对LPS激活的小胶质细胞NADPH氧化酶各亚基mRNA表达的影响 | 第92-94页 |
| 5. 西地那非对LPS活化的小胶质细胞内MAPKs信号通路蛋白表达的影响 | 第94-96页 |
| 6. 优克那非对LPS活化的小胶质细胞内MAPKs信号通路蛋白表达的影响 | 第96-98页 |
| 7. 西地那非和优克那非对LPS活化的小胶质细胞内IKBα磷酸化和降解的影响 | 第98-101页 |
| 8. 西地那非和潘生丁对LPS活化的N9小胶质细胞NF-κB上游信号通路IKK-α/β及其磷酸化蛋白表达的影响 | 第101-102页 |
| 9. 西地那非和潘生丁对LPS活化的N9小胶质细胞NF-κB上游信号通路TAK1及其磷酸化蛋白表达的影响 | 第102-104页 |
| 10. 西地那非和潘生丁对LPS活化的N9小胶质细胞NF-κB上游信号通路IRAK1蛋白表达的影响 | 第104-105页 |
| 11. 西地那非和潘生丁对LPS活化的N9小胶质细胞NF-κB p65亚基磷酸化的影响 | 第105-106页 |
| 12. Western-blot法考察西地那非对LPS活化的N9小胶质细胞NF-κB核转位的影响 | 第106-107页 |
| 13. 高内涵法检测LPS对N9小胶质细胞NF-κB核转位的影响 | 第107-108页 |
| 14. 高内涵法考察西地那非和优克那非对LPS活化的N9小胶质细胞NF-κB p65亚基核转位的影响 | 第108-110页 |
| 15. 激光共聚焦法考察西地那非和优克那非对LPS活化的N9小胶质细胞NF-κB p65核转位的影响 | 第110页 |
| 第五节 结论与讨论 | 第110-114页 |
| 小结 | 第114-116页 |
| 第四章 PDE5抑制剂抑制小胶质细胞活化的cGMP依赖和非依赖机制研究 | 第116-137页 |
| 第一节 概述 | 第116-117页 |
| 第二节 实验材料 | 第117页 |
| 1. 细胞株 | 第117页 |
| 2. 药品与试剂 | 第117页 |
| 3. 实验仪器 | 第117页 |
| 第三节 实验方法 | 第117-121页 |
| 1. 化合物的来源和配制 | 第117页 |
| 2. 小鼠小胶质细胞系N9的培养 | 第117-118页 |
| 3. 亚硝酸盐含量的测定 | 第118页 |
| 4. MTT法检测小胶质细胞的成活率 | 第118页 |
| 5. iROS水平测定 | 第118页 |
| 6. RT-PCR法考察小胶质细胞PKG I α mRNA表达 | 第118-119页 |
| 7. Western-blot analysis(免疫印迹法) | 第119-121页 |
| 8. 统计学处理方法 | 第121页 |
| 第四节 实验结果 | 第121-132页 |
| 1. 8-Br-cGMP对N9小胶质细胞存活率和NO释放的影响 | 第121页 |
| 2. 8-Br-cGMP对LPS活化的N9小胶质细胞NO释放的影响 | 第121-122页 |
| 3. 8-Br-cGMP对LPS (2.5 ng/ml)活化N9小胶质细胞不同时间NO释放的影响 | 第122-123页 |
| 4. 8-Br-cGMP对LPS活化的N9小胶质细胞TNF-α释放的影响 | 第123-124页 |
| 5. 8-Br-cGMP对LPS活化的N9小胶质细胞iROS水平的影响 | 第124-125页 |
| 6. dbcAMP对N9小胶质细胞存活率和NO释放的影响 | 第125页 |
| 7. dbcAMP对不同浓度的LPS活化的N9小胶质细胞NO释放的影响 | 第125-126页 |
| 8. dbcAMP对LPS活化的N9小胶质细胞TNF-α释放的影响 | 第126-127页 |
| 9. dbcAMP对LPS活化的N9小胶质细胞iROS水平的影响 | 第127-128页 |
| 10. GCs/PKG抑制剂对西地那非抑制小胶质细胞活化所致NO释放和iROS水平的逆转作用 | 第128页 |
| 11. GCs/PKG抑制剂对西地那非抑制小胶质细胞活化所致iNOS和gp91phox蛋白表达是否有逆转作用 | 第128-130页 |
| 12. 西地那非对LPS诱导N9小胶质细胞内cGMP水平的影响 | 第130-131页 |
| 13. 西地那非对LPS诱导N9小胶质细胞PKG1αmRNA表达的影响 | 第131-132页 |
| 第五节 结论与讨论 | 第132-135页 |
| 小结 | 第135-137页 |
| 结论 | 第137-139页 |
| 参考文献 | 第139-155页 |
| 致谢 | 第155-156页 |
| 发表文章 | 第156-157页 |
| 会议摘要 | 第157-158页 |
| 缩略词表 | 第158-160页 |
| 个人简历 | 第160-161页 |
| 附件 | 第161-167页 |
