| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-23页 |
| 1.1 羊乳的营养价值及脂肪酸组成 | 第13页 |
| 1.2 脂肪酸的摄取与合成 | 第13-17页 |
| 1.2.1 羊乳脂肪酸的来源 | 第13-14页 |
| 1.2.2 脂肪酸合成关键酶及功能 | 第14-16页 |
| 1.2.3 甘油三酯代谢关键酶及功能 | 第16页 |
| 1.2.4 脂肪酸合成转录调节因子 | 第16-17页 |
| 1.3 EGFR蛋白的结构与功能 | 第17-19页 |
| 1.3.1 EGFR蛋白结构和分布 | 第17页 |
| 1.3.2 EGFR在不同组织中的表达丰度 | 第17-18页 |
| 1.3.3 EGFR家族的配体 | 第18页 |
| 1.3.4 EGFR的二聚化，磷酸化与胞内信号传导 | 第18-19页 |
| 1.3.5 EGFR蛋白的表达，內吞与降解 | 第19页 |
| 1.4 EGFR参与的信号通路 | 第19-20页 |
| 1.5 EGFR影响乳腺发育及泌乳 | 第20-21页 |
| 1.6 EGFR与脂类代谢 | 第21页 |
| 1.7 EGFR与乳铁蛋白合成 | 第21-22页 |
| 1.8 本研究的目的及意义 | 第22-23页 |
| 第二章 奶山羊EGFR基因CDs区克隆、生物信息学分析及不同泌乳时期表达分析 | 第23-33页 |
| 2.1 材料与方法 | 第23-27页 |
| 2.1.1 试验动物 | 第23页 |
| 2.1.2 主要仪器和试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 乳腺上皮细胞及乳腺组织总RNA的提取及cDNA合成 | 第23页 |
| 2.1.4 引物设计及合成 | 第23-24页 |
| 2.1.5 EGFR基因CDS区的PCR扩增 | 第24-25页 |
| 2.1.6 pMD19-T-EGFR克隆载体的构建及鉴定 | 第25-26页 |
| 2.1.7 生物信息学分析 | 第26页 |
| 2.1.8 不同泌乳时期EGFR基因表达量检测 | 第26-27页 |
| 2.1.9 数据分析 | 第27页 |
| 2.2 结果与分析 | 第27-31页 |
| 2.2.1 乳腺总RNA的鉴定 | 第27页 |
| 2.2.2 EGFR基因CDs区的克隆及鉴定 | 第27-29页 |
| 2.2.3 EGFR基因的一级结构分析 | 第29页 |
| 2.2.4 EGFR同源性分析 | 第29-30页 |
| 2.2.5 EGFR蛋白跨膜结构，信号肽、疏水性分析及三级结构预测 | 第30-31页 |
| 2.2.6 EGFR基因在不同泌乳时期表达量分析 | 第31页 |
| 2.3 讨论 | 第31-32页 |
| 2.3.1 乳腺上皮细胞的采集与培养 | 第31页 |
| 2.3.2 EGFR基因CDS区的PCR扩增及验证 | 第31-32页 |
| 2.3.3 不同泌乳时期EGFR基因的表达 | 第32页 |
| 2.4 本章小结 | 第32-33页 |
| 第三章 截短型奶山羊EGFR蛋白原核表达及其多克隆抗体制备 | 第33-43页 |
| 3.1 材料与方法 | 第33-37页 |
| 3.1.1 试验动物 | 第33页 |
| 3.1.2 主要仪器与试剂 | 第33-34页 |
| 3.1.3 主要溶液的配制 | 第34页 |
| 3.1.4 截短型奶山羊EGFR基因（ECD）序列的克隆 | 第34-35页 |
| 3.1.5 pET-32a(+)-ECD载体的构建与鉴定 | 第35页 |
| 3.1.6 重组蛋白的诱导表达及鉴定 | 第35-36页 |
| 3.1.7 重组蛋白的大量诱导表达及蛋白纯化 | 第36-37页 |
| 3.1.8 多克隆抗体的制备 | 第37页 |
| 3.1.9 抗血清的效价和特异性分析 | 第37页 |
| 3.1.10 数据分析 | 第37页 |
| 3.2 结果与分析 | 第37-42页 |
| 3.2.1 pET-32a(+)-ECD重组载体的构建与鉴定 | 第37-38页 |
| 3.2.2 重组蛋白的表达及鉴定 | 第38-39页 |
| 3.2.3 重组蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| 3.2.4 奶山羊EGFR蛋白多克隆抗体效价评估 | 第40-41页 |
| 3.2.5 奶山羊EGFR蛋白多克隆抗体特异性验证 | 第41-42页 |
| 3.3 讨论 | 第42页 |
| 3.4 本章小结 | 第42-43页 |
| 第四章 奶山羊EGFR基因影响乳成分合成基因的研究 | 第43-59页 |
| 4.1 材料与方法 | 第43-47页 |
| 4.1.1 主要仪器和试剂 | 第43页 |
| 4.1.2 腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV-EGFR的构建与鉴定 | 第43-44页 |
| 4.1.3 重组腺病毒载体pAdEasy-EGFR的构建 | 第44页 |
| 4.1.4 腺病毒的包装和扩繁 | 第44-45页 |
| 4.1.5 重组腺病毒的鉴定、滴度检测及感染奶山羊乳腺上皮细胞最佳MOI值的确定 | 第45页 |
| 4.1.6 奶山羊EGFR基因过表达效率的检测 | 第45页 |
| 4.1.7 过表达EGFR对脂肪酸和乳铁蛋白合成基因表达水平的影响 | 第45-46页 |
| 4.1.8 奶山羊EGFR基因的干扰效率检测 | 第46-47页 |
| 4.1.9 干扰EGFR对脂肪酸和乳铁蛋白合成基因表达水平的影响 | 第47页 |
| 4.1.10 数据分析 | 第47页 |
| 4.2 结果 | 第47-55页 |
| 4.2.1 腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV-EGFR的双酶切鉴定 | 第47页 |
| 4.2.2 重组腺病毒载体pAdEasy-EGFR的Pac I酶切鉴定 | 第47-48页 |
| 4.2.3 腺病毒的包装与扩繁及鉴定 | 第48-49页 |
| 4.2.4 重组腺病毒感染乳腺上皮细胞最佳MOI值的确定 | 第49-50页 |
| 4.2.5 腺病毒过表达效率的检测 | 第50-51页 |
| 4.2.6 过表达EGFR对脂肪酸和乳铁蛋白合成基因表达水平的影响 | 第51-53页 |
| 4.2.7 奶山羊EGFR基因的干扰效率检测 | 第53页 |
| 4.2.8 干扰EGFR对脂肪酸和乳铁蛋白合成基因表达水平的影响 | 第53-55页 |
| 4.3 讨论 | 第55-58页 |
| 4.3.1 腺病毒载体的构建 | 第55页 |
| 4.3.2 奶山羊EGFR基因功能研究 | 第55-58页 |
| 4.4 本章小结 | 第58-59页 |
| 结论与创新点 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-68页 |
| 附录 | 第68-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 作者简介 | 第78页 |
