| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-24页 |
| ·前言 | 第11-13页 |
| ·共生固氮与根瘤菌 | 第13-18页 |
| ·根瘤菌系统发育与分类 | 第14-15页 |
| ·共生体的形成 | 第15-17页 |
| ·共生固氮生理学 | 第17-18页 |
| ·微生物的硫代谢 | 第18-23页 |
| ·微生物无机硫的同化 | 第19-21页 |
| ·微生物硫代谢的研究趋势及其进展 | 第21-22页 |
| ·根瘤菌的硫代谢 | 第22-23页 |
| ·本课题研究的背景、意义 | 第23-24页 |
| 第二章 材料和方法 | 第24-37页 |
| ·菌株与质粒 | 第24-25页 |
| ·培养基,抗生素与菌株生长条件 | 第25-27页 |
| ·试剂,溶液和缓冲液 | 第27页 |
| ·根瘤菌总DNA的提取 | 第27页 |
| ·质粒DNA的制备 | 第27-28页 |
| ·DNA片段的分离与回收 | 第28页 |
| ·DNA片段的纯化 | 第28-29页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第29页 |
| ·DNA的酶切 | 第29-30页 |
| ·连接与转化 | 第30-31页 |
| ·PCR(聚合酶链式反应)扩增DNA | 第31-32页 |
| ·三亲本接合 | 第32-33页 |
| ·利用质粒转座子pTnMod-Rkm'构建突变体库 | 第33-34页 |
| ·质粒转座子pTnMod-Rkm'简介 | 第33-34页 |
| ·突变体库的构建 | 第34页 |
| ·同源单交换突变体的形成及其互补菌株的构建 | 第34-35页 |
| ·植株试验 | 第35-36页 |
| ·cysDN在GenBank的登录号 | 第36-37页 |
| 第三章 S.Fredii WGF03突变体库的构建及突变体的筛选 | 第37-41页 |
| ·引言 | 第37-38页 |
| ·WGF03突变体库的建立 | 第38-39页 |
| ·三亲接合随机插入突变WGF03 | 第38页 |
| ·突变体的验证 | 第38-39页 |
| ·硫酸盐同化途径突变体的筛选 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| 第四章 突变体基因的克隆及生物信息学分析 | 第41-45页 |
| ·突变体基因的克隆 | 第41-45页 |
| ·突变株总DNA的提取 | 第41页 |
| ·突变株105.26基因组DNA与pMD-18T克隆载体的BamHⅠ酶切 | 第41-42页 |
| ·连接与转化 | 第42-45页 |
| 第五章 突变体的构建与分析 | 第45-52页 |
| ·前言 | 第45页 |
| ·同源单交换重组质粒的构建 | 第45-49页 |
| ·各个ORF部分片段的克隆 | 第45-46页 |
| ·将pK18mob自杀质粒用SmmaI酶切 | 第46页 |
| ·部分片段与pK18mob的连接与转化 | 第46-47页 |
| ·连接片段正反向验证 | 第47-49页 |
| ·WGF03同源单交换突变体的构建及验证 | 第49-52页 |
| ·三亲本接合及突变体筛选 | 第49页 |
| ·突变体的验证 | 第49-52页 |
| 第六章 互补菌株的构建和植株试验 | 第52-62页 |
| ·前言 | 第52-53页 |
| ·利用三亲本接合法构建互补菌株 | 第52页 |
| ·互补菌株的验证 | 第52-53页 |
| ·出发菌株,突变菌株,互补菌株的生长状况 | 第53-59页 |
| ·WGF03, cysDF/WGF03, cysDR/WGF03, HcysDF/WGF03,HcysDR/WGF03利用无机硫源生长状况 | 第53-55页 |
| ·WGF03, cysDF/WGF03, cysDR/WGF03, HcysDF/WGF03,HcysDR/WGF03利用有机硫源生长状况 | 第55-56页 |
| ·WGF03, cysNF/WGF03, cysNR/WGF03, HcysNF/WGF03,HcysNR/WGF03利用无机硫源生长状况 | 第56-58页 |
| ·WGF03, cysNF/WGF03, cysNR/WGF03, HcysNF/WGF03,HcysNR/WGF03利用有机硫源生长状况 | 第58-59页 |
| ·植株试验 | 第59-62页 |
| ·植株的结瘤动力学测定 | 第59-60页 |
| ·竞争结瘤检测 | 第60页 |
| ·共生结瘤固氮效应检测 | 第60-62页 |
| 第七章 结果与讨论 | 第62-65页 |
| ·实验结果 | 第62-63页 |
| ·讨论 | 第63-64页 |
| ·本工作后续研究 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第73页 |
