| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-26页 |
| ·氮源与生物的关系 | 第11页 |
| ·固氮作用 | 第11-12页 |
| ·生物固氮 | 第12-14页 |
| ·生物固氮的机制 | 第12页 |
| ·生物固氮的意义 | 第12-13页 |
| ·生物固氮的方式 | 第13-14页 |
| ·根瘤菌-豆科植物的共生固氮作用 | 第14-16页 |
| ·共生固氮的意义 | 第14页 |
| ·根瘤菌的分类 | 第14-16页 |
| ·根瘤菌-豆科植物的结瘤作用 | 第16-21页 |
| ·根瘤形成的过程 | 第17-18页 |
| ·根瘤的种类 | 第18页 |
| ·根瘤菌与宿主信号交换的机制 | 第18-19页 |
| ·Nod信号子结构与宿主特异性 | 第19-20页 |
| ·Nod信号子的识别作用与信号转导 | 第20页 |
| ·固氮调节机制与同化作用 | 第20-21页 |
| ·硫元素与生物的关系 | 第21-22页 |
| ·硫元素对生物的意义 | 第21页 |
| ·硫元素与其他元素代谢的相互作用 | 第21-22页 |
| ·硫代谢 | 第22-25页 |
| ·硫酸盐同化途径 | 第22-24页 |
| ·结瘤基因与硫代谢的关系 | 第24-25页 |
| ·pdxP与根瘤菌硫代谢的关系 | 第25页 |
| ·本研究课题的目的 | 第25-26页 |
| 第二章 材料与方法 | 第26-40页 |
| ·材料 | 第26-27页 |
| ·培养基、培养条件和菌种保存 | 第27-29页 |
| ·培养基 | 第27-28页 |
| ·培养条件 | 第28页 |
| ·菌种保存 | 第28-29页 |
| ·抗生素 | 第29页 |
| ·溶液、缓冲液和试剂 | 第29页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第29-30页 |
| ·根瘤菌基因组DNA的提取 | 第30-31页 |
| ·质粒DNA的制备 | 第31-32页 |
| ·限制性内切酶消化DNA | 第32页 |
| ·DNA酶切片段回收 | 第32-33页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR)体外扩增DNA | 第33-34页 |
| ·扩增反应 | 第33-34页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第34页 |
| ·DNA连接 | 第34页 |
| ·DNA转化 | 第34-36页 |
| ·CaCl_2法制备感受态细胞 | 第34-35页 |
| ·化学转化 | 第35-36页 |
| ·三亲本接合 | 第36-37页 |
| ·根瘤菌生长曲线的测定 | 第37-38页 |
| ·大豆植株实验 | 第38-40页 |
| 第三章 克隆5'-磷酸吡哆醇磷酸酶基因(pdxP) | 第40-46页 |
| ·筛选与根瘤菌硫代谢相关的基因 | 第40-41页 |
| ·构建转座子随机插入突变体 | 第40页 |
| ·用选择培养基筛选随机突变体 | 第40-41页 |
| ·测定所选突变体被转座子插入的两侧基因序列 | 第41-46页 |
| ·克隆转座子插入的两侧序列 | 第41-43页 |
| ·对筛选基因进行生物信息学分析 | 第43-46页 |
| 第四章 pdxP基因的突变及突变体的研究 | 第46-59页 |
| ·pdxP基因突变体的构建 | 第46-51页 |
| ·扩增pdxP基因的部分片段 | 第47-48页 |
| ·利用pK18mob质粒同源单交换构建重组质粒 | 第48页 |
| ·pK18-bpdxp重组质粒的验证 | 第48-50页 |
| ·构建pdxP基因的突变体 | 第50-51页 |
| ·构建互补体 | 第51-54页 |
| ·pdxP基因突变体及互补体的功能验证 | 第54-57页 |
| ·植株实验 | 第57-59页 |
| ·大豆植株的结瘤时间测定 | 第57页 |
| ·共生固氮效应检测 | 第57-59页 |
| 第五章 总结与讨论 | 第59-63页 |
| ·总结 | 第59-60页 |
| ·讨论 | 第60-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第72页 |