| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 文献综述 | 第12-22页 |
| 第一章 布鲁氏菌的研究进展 | 第12-22页 |
| 1.1 布鲁氏菌感染机制 | 第12-13页 |
| 1.2 布鲁氏菌毒力因子 | 第13页 |
| 1.3 布鲁氏菌IV型分泌系统 | 第13-19页 |
| 1.3.1 T4SS的组成结构 | 第14页 |
| 1.3.2 T4SS的作用机制研究 | 第14-15页 |
| 1.3.3 布鲁氏菌T4SS分泌的效应分子 | 第15-17页 |
| 1.3.4 布鲁氏菌T4SS效应分子可能的作用分子机制 | 第17-19页 |
| 1.4 布鲁氏菌与内质网应激 | 第19-20页 |
| 1.4.1 内质网应激与细胞凋亡 | 第19页 |
| 1.4.2 布鲁氏菌感染与内质网应激 | 第19-20页 |
| 1.5 布鲁氏菌与胎盘滋养层细胞 | 第20-21页 |
| 1.6 本试验研究目的及主要内容 | 第21-22页 |
| 试验研究 | 第22-46页 |
| 第二章 布鲁氏菌VceC基因真核表达载体的构建 | 第22-33页 |
| 2.1 试验材料及仪器设备 | 第22-23页 |
| 2.1.1 菌株和细胞系 | 第22页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第23页 |
| 2.2 方法 | 第23-29页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第23-24页 |
| 2.2.2 模板制备 | 第24页 |
| 2.2.3 PCR扩增VceC | 第24页 |
| 2.2.4 VceC片段胶回收 | 第24-25页 |
| 2.2.5 VceC与pMD19T-Simple载体连接 | 第25-26页 |
| 2.2.6 pMD19T-Simple连接产物酶切鉴定 | 第26页 |
| 2.2.7 VceC与pEGFP-C1载体的酶切及胶回收 | 第26页 |
| 2.2.8 VceC与pEGFP-C1载体的连接及转化 | 第26-27页 |
| 2.2.9 质粒提取并酶切鉴定 | 第27页 |
| 2.2.10 VceC蛋白表达鉴定 | 第27-29页 |
| 2.3 结果 | 第29-31页 |
| 2.3.1 布鲁氏菌基因组提取结果 | 第29-30页 |
| 2.3.2 布鲁氏菌VceC基因PCR结果 | 第30页 |
| 2.3.3 布鲁氏菌VceC基因与pMD19T-Simple载体连接 | 第30页 |
| 2.3.4 VceC基因测序结果 | 第30-31页 |
| 2.3.5 VceC与pEGFP-C1载体连接产物鉴定 | 第31页 |
| 2.3.6 VceC蛋白表达 | 第31页 |
| 2.4 讨论 | 第31-32页 |
| 2.5 小结 | 第32-33页 |
| 第三章 VceC蛋白对GTC内质网应激通路的激活 | 第33-42页 |
| 3.1 试验材料 | 第33-34页 |
| 3.1.1 质粒和细胞系 | 第33页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第33-34页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第34页 |
| 3.2 试验方法 | 第34-37页 |
| 3.2.1 山羊滋养层细胞培养 | 第34页 |
| 3.2.2 免疫荧光和Western Blot检测质粒转染GTC的蛋白表达 | 第34-35页 |
| 3.2.3 VceC对GTC内质网应激的标志性分子GRP78和CHOP表达量影响 | 第35页 |
| 3.2.4 VceC对GTC内质网应激UPR反应相关分子表达影响 | 第35-37页 |
| 3.2.5 VceC对GTC的UPR通路中IRE1活性的检测 | 第37页 |
| 3.3 结果 | 第37-40页 |
| 3.3.1 免疫荧光检测GFP和VceC-GFP表达 | 第37-38页 |
| 3.3.2 Western Blot检测GFP和VceC-GFP表达 | 第38页 |
| 3.3.3 VceC引起GTC内质网应激标志蛋白表达量变化 | 第38-39页 |
| 3.3.4 VceC对GTC内质网应激UPR信号通路的激活作用 | 第39页 |
| 3.3.5 VceC引起GTC的IRE1信号通路激活 | 第39-40页 |
| 3.4 讨论 | 第40-41页 |
| 3.5 小结 | 第41-42页 |
| 第四章 VceC蛋白对GTC性腺激素分泌的影响 | 第42-46页 |
| 4.1 试验材料及仪器设备 | 第42页 |
| 4.1.1 质粒和细胞系 | 第42页 |
| 4.1.2 试验材料 | 第42页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第42页 |
| 4.2 试验方法 | 第42-43页 |
| 4.2.1 ELISA检测孕酮的表达变化 | 第42-43页 |
| 4.2.2 ELISA检测雌激素表达变化 | 第43页 |
| 4.3 结果 | 第43-44页 |
| 4.3.1 VceC转染GTC对其孕酮分泌的影响 | 第43-44页 |
| 4.3.2 VceC转染GTC对其雌激素分泌的影响 | 第44页 |
| 4.4 讨论 | 第44-45页 |
| 4.5 小结 | 第45-46页 |
| 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-54页 |
| 附录 | 第54-55页 |
| 缩略词 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 作者简介 | 第57页 |
