| 摘要 | 第11-14页 |
| ABSTRACT | 第14-16页 |
| 符号与缩略语说明 | 第17-18页 |
| 前言 | 第18-19页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-45页 |
| 1 粘细菌简介 | 第19-20页 |
| 1.1 粘细菌的发现 | 第19页 |
| 1.2 粘细菌的分类 | 第19-20页 |
| 2 粘细菌的应用 | 第20-25页 |
| 2.1 粘细菌的次级代谢产物 | 第21-22页 |
| 2.2 粘细菌抗病原真菌方面的应用 | 第22-25页 |
| 3 粘细菌的发育机制研究 | 第25-30页 |
| 3.1 粘细菌子实体的形成 | 第25-27页 |
| 3.2 粘细菌发育信号分子 | 第27-29页 |
| 3.3 Oar蛋白 | 第29-30页 |
| 4 粘细菌对复杂化合物的利用 | 第30-33页 |
| 4.1 粘细菌对纤维素的利用 | 第30-31页 |
| 4.2 粘细菌对淀粉的利用 | 第31-33页 |
| 5 本研究的意义 | 第33-34页 |
| 参考文献 | 第34-45页 |
| 第二章 广谱抗真菌粘细菌EGB的鉴定及其抗真菌性质的研究 | 第45-75页 |
| 第一节 广谱抗真菌粘细菌EGB的鉴定 | 第45-53页 |
| 1 材料与方法 | 第45-49页 |
| 1.1 菌株与培养基 | 第45-46页 |
| 1.2 供试菌株的培养 | 第46页 |
| 1.3 菌株EGB抗菌谱 | 第46页 |
| 1.4 粘细菌EGB的初步鉴定 | 第46-49页 |
| 2 结果与分析 | 第49-53页 |
| 2.1 菌株EGB抗菌谱 | 第49-50页 |
| 2.2 菌株EGB的初步鉴定 | 第50-51页 |
| 2.3 菌株EGB系统发育地位的确定 | 第51-53页 |
| 第二节 Corallococcus sp. EGB抗植物病原真菌的研究 | 第53-64页 |
| 1 材料与方法 | 第53-56页 |
| 1.1 菌株和培养条件 | 第53页 |
| 1.2 Corallococcus sp. EGB抗植物病原真菌生防试验 | 第53-55页 |
| 1.3 Corallococcus sp. EGB抗植物病原真菌机理初步研究 | 第55-56页 |
| 2 结果与分析 | 第56-64页 |
| 2.1 Corallococcus sp. EGB对黄瓜枯萎病的防治效果 | 第56-60页 |
| 2.2 Corallococcus sp. EGB对稻瘟病的防治效果 | 第60-61页 |
| 2.3 Corallococcus sp. EGB抗植物病原真菌机理初步研究 | 第61-64页 |
| 第三节 Corallococcus sp.EGB抗病机制的研究 | 第64-70页 |
| 1 材料与方法 | 第64-65页 |
| 1.1 试剂与仪器 | 第64页 |
| 1.2 Corallococcus sp. EGB胞外上清酶液底物谱分析 | 第64页 |
| 1.3 水解酵母细胞壁电镜观察 | 第64页 |
| 1.4 酵母细胞壁水解产物分析 | 第64-65页 |
| 2 结果与分析 | 第65-70页 |
| 2.1 Corallococcus sp. EGB胞外上清酶液底物谱分析 | 第65-66页 |
| 2.2 水解酵母细胞壁电镜观察 | 第66-67页 |
| 2.3 酵母细胞壁水解产物分析 | 第67-69页 |
| 2.4 酵母细胞壁水解模型 | 第69-70页 |
| 本章讨论 | 第70-71页 |
| 本章小节 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-75页 |
| 第三章 Corallococcus sp.EGB来源的β-1,6-葡聚糖酶GluM的分离纯化及功能验证 | 第75-103页 |
| 第一节 Corallococcus sp.EGB菌株粗酶液特性研究 | 第75-79页 |
| 1 材料与方法 | 第75-77页 |
| 1.1 材料与仪器 | 第75-76页 |
| 1.2 菌株EGB的粗酶液的制备 | 第76页 |
| 1.3 葡聚糖酶的酶活力测定 | 第76页 |
| 1.4 蛋白含量的测定 | 第76页 |
| 1.5 pH对葡聚糖酶活性的影响 | 第76页 |
| 1.6 温度对葡聚糖酶活性的影响 | 第76页 |
| 1.7 化学试剂对葡聚糖酶活性的影响 | 第76-77页 |
| 2 结果与分析 | 第77-79页 |
| 2.1 pH对葡聚糖酶活性的影响 | 第77页 |
| 2.2 温度对葡聚糖酶活性的影响 | 第77-78页 |
| 2.3 金属离子和有机试剂对葡聚糖酶活性的影响 | 第78-79页 |
| 第二节 Corallcoccus sp. EGB来源的β-1,6-葡聚糖酶GluM的分离纯化 | 第79-88页 |
| 1 材料与方法 | 第79-81页 |
| 1.1 材料 | 第79页 |
| 1.2 酶活测定 | 第79页 |
| 1.3 蛋白含量的测定 | 第79页 |
| 1.4 硫酸铵分级沉淀 | 第79页 |
| 1.5 底物吸附 | 第79页 |
| 1.6 葡聚糖酶解吸附 | 第79-80页 |
| 1.7 SDS-PAGE电泳及酶谱分析 | 第80页 |
| 1.8 温度和pH对纯化β-1,6-葡聚糖酶pGluM活性的影响 | 第80页 |
| 1.9 纯化β-1,6-葡聚糖酶pGluM底物谱分析 | 第80页 |
| 1.10 纯化β-1,6-葡聚糖酶pGluM对β-1,6-葡聚糖水解产物分析 | 第80页 |
| 1.11 纯化β-1,6-葡聚糖酶pGluM对稻瘟菌菌丝及孢子的处理实验 | 第80-81页 |
| 2 结果与分析 | 第81-88页 |
| 2.1 葡聚糖酶硫酸铵分级沉淀 | 第81页 |
| 2.2 β-1,6葡聚糖酶的分离纯化 | 第81-83页 |
| 2.3 温度和pH对纯化β-1,6-葡聚糖酶pGluM的影响 | 第83-84页 |
| 2.4 纯化β-1,6 葡聚糖酶pGluM底物谱分析 | 第84页 |
| 2.5 纯化β-1,6-葡聚糖酶pGluM水解产物分析 | 第84-85页 |
| 2.6 纯化β-1,6-葡聚糖酶pGluM处理稻瘟菌菌丝及孢子实验 | 第85-88页 |
| 第三节 β-1,6葡聚糖酶gluM基因克隆及功能验证 | 第88-97页 |
| 1 材料与方法 | 第88-92页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第88页 |
| 1.2 菌株培养条件 | 第88-89页 |
| 1.3 β-1,6-葡聚糖酶pGluM肽指纹图谱鉴定 | 第89页 |
| 1.4 PCR扩增gluM使用的引物 | 第89-90页 |
| 1.5 gluM基因的PCR扩增 | 第90页 |
| 1.6 表达载体的构建 | 第90页 |
| 1.7 重组酶的活性验证 | 第90-91页 |
| 1.8 重组酶批量发酵表达 | 第91页 |
| 1.9 重组表达β-1,6-葡聚糖酶rGluM功能验证 | 第91-92页 |
| 1.10 β-1,6-葡聚糖酶GluM活性区域分析 | 第92页 |
| 1.11 序列分析软件、在线分析网址 | 第92页 |
| 2 结果与分析 | 第92-97页 |
| 2.1 gluM基因的PCR扩增 | 第92页 |
| 2.2 GluM蛋白序列分析 | 第92-94页 |
| 2.3 重组酶的活性验证 | 第94-95页 |
| 2.4 重组表达β-1,6-葡聚糖酶rGluM对稻瘟菌孢子萌发的影响 | 第95-97页 |
| 2.5 β-1,6-葡聚糖酶GluM活性区域分析 | 第97页 |
| 本章讨论 | 第97-99页 |
| 本章小结 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-103页 |
| 第四章 Oar蛋白在粘细菌发育功能中的研究 | 第103-133页 |
| 第一节 Oar在粘细菌发育过程中的表型分析 | 第103-117页 |
| 1 材料与方法 | 第103-108页 |
| 1.1 材料 | 第103-106页 |
| 1.2 质粒构建 | 第106页 |
| 1.3 粘细菌M.xanthus电转化 | 第106-107页 |
| 1.4 基因敲除对菌株基本发育过程的影响 | 第107-108页 |
| 1.5 Oar蛋白序列分析 | 第108页 |
| 2 结果与分析 | 第108-117页 |
| 2.1 Oar蛋白序列分析 | 第108-109页 |
| 2.2 基因敲除质粒的构建 | 第109-110页 |
| 2.3 基因敲除菌株的构建 | 第110-111页 |
| 2.4 缺陷菌株运动性分析 | 第111-113页 |
| 2.5 缺陷菌株子实体形成情况分析 | 第113-115页 |
| 2.6 缺陷菌株捕食行为分析 | 第115-117页 |
| 第二节 Oar在粘细菌发育过程中的功能分析 | 第117-126页 |
| 1 材料与方法 | 第117-119页 |
| 1.1 材料 | 第117页 |
| 1.2 Oar基因的PCR扩增 | 第117页 |
| 1.3 Oar蛋白β-1,6葡聚糖酶活性分析 | 第117页 |
| 1.4 Oar蛋白的细胞定位 | 第117页 |
| 1.5 Oar蛋白通道运输功能分析 | 第117-118页 |
| 1.6 oar基因缺陷菌株和DK1622菌株胞外组分活性分析 | 第118页 |
| 1.7 DK1622菌株胞外活性组分分子量的确定 | 第118页 |
| 1.8 DK1622菌株胞外活性组分来源的初步判断 | 第118-119页 |
| 1.9 Oar蛋白参与粘细菌发育过程的初步分析 | 第119页 |
| 2 结果与分析 | 第119-126页 |
| 2.1 Oar蛋白β-1,6葡聚糖酶活性分析 | 第119-120页 |
| 2.2 Oar蛋白细胞定位 | 第120页 |
| 2.3 Oar蛋白通道运输功能分析 | 第120-122页 |
| 2.4 oar基因缺陷菌株和DK1622菌株胞外组分活性差异性分析 | 第122-123页 |
| 2.5 DK1622菌株胞外活性物质分子量的确定 | 第123-124页 |
| 2.6 DK1622菌株胞外活性组分来源的初步判断 | 第124-126页 |
| 2.7 Oar蛋白参与粘细菌发育过程的初步分析 | 第126页 |
| 本章讨论 | 第126-128页 |
| 本章小结 | 第128-129页 |
| 参考文献 | 第129-133页 |
| 第五章 Corallococcus sp.EGB来源α-1,4淀粉酶AmyM的分离纯化及特性研究 | 第133-167页 |
| 第一节 Corallococcus sp.EGB菌株粗酶液水解淀粉特性研究 | 第133-137页 |
| 1 材料与方法 | 第133-135页 |
| 1.1 材料与仪器 | 第133-134页 |
| 1.2 粗酶液的制备 | 第134页 |
| 1.3 淀粉酶的酶活力测定 | 第134页 |
| 1.4 蛋白含量的测定 | 第134页 |
| 1.5 pH对粗酶液水解淀粉的影响 | 第134页 |
| 1.6 温度对粗酶液水解淀粉的影响 | 第134页 |
| 1.7 金属离子对粗酶液水解淀粉的影响 | 第134-135页 |
| 2 结果与分析 | 第135-137页 |
| 2.1 pH对粗酶液水解淀粉的影响 | 第135页 |
| 2.2 温度对粗酶液水解淀粉的影响 | 第135-136页 |
| 2.3 金属离子对粗酶液水解淀粉的影响 | 第136-137页 |
| 第二节 Corallcoccus sp.EGB来源α-1,4淀粉酶AmyM的分离纯化 | 第137-142页 |
| 1 材料与方法 | 第137-138页 |
| 1.1 材料 | 第137页 |
| 1.2 淀粉酶的酶活力测定 | 第137页 |
| 1.3 蛋白含量的测定 | 第137页 |
| 1.4 硫酸铵分级沉淀 | 第137页 |
| 1.5 糖原-淀粉酶复合物的形成 | 第137页 |
| 1.6 淀粉酶的解吸附 | 第137-138页 |
| 1.7 SDS-PAGE电泳及酶谱分析 | 第138页 |
| 1.8 纯化淀粉酶对淀粉水解产物分析 | 第138页 |
| 2 结果与分析 | 第138-142页 |
| 2.1 淀粉酶硫酸铵分级沉淀 | 第138-139页 |
| 2.2 淀粉酶的分离纯化 | 第139-141页 |
| 2.3 纯化淀粉酶对淀粉水解产物分析 | 第141-142页 |
| 第三节 Corallcoccus sp. EGB来源α-1,4淀粉酶AmyM基因克隆及酶学性质研究 | 第142-159页 |
| 1 材料与方法 | 第142-147页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第142页 |
| 1.2 培养基与试剂 | 第142页 |
| 1.3 肽指纹图谱鉴定 | 第142-143页 |
| 1.4 PCR扩增amyM使用的引物 | 第143页 |
| 1.5 amyM基因的PCR扩增 | 第143页 |
| 1.6 序列分析软件、在线分析网址 | 第143-144页 |
| 1.7 表达载体的构建 | 第144页 |
| 1.8 表达菌株的构建 | 第144页 |
| 1.9 重组α-淀粉酶rAmyM的诱导表达 | 第144-145页 |
| 1.10 重组α-淀粉酶rAmyM的纯化 | 第145页 |
| 1.11 重组α-淀粉酶rAmyM酶学特性的研究 | 第145-147页 |
| 1.12 重组酶rAmyM对淀粉水解的应用性研究 | 第147页 |
| 2 结果与分析 | 第147-159页 |
| 2.1 amyM基因的PCR扩增 | 第147页 |
| 2.2 α-淀粉酶AmyM氨基酸序列分析 | 第147-149页 |
| 2.3 重组淀粉酶rAmyM的纯化 | 第149-150页 |
| 2.4 温度和pH对淀粉酶rAmyM的影响 | 第150-151页 |
| 2.5 金属离子和常用化合物对淀粉酶rAmyM活性的影响 | 第151-153页 |
| 2.6 盐浓度对淀粉酶rAmyM活性及稳定性的影响 | 第153-154页 |
| 2.7 重组酶rAmyM的底物特异性 | 第154-157页 |
| 2.8 重组酶rAmyM的米氏常数(K_m)和最大反应速率(V_(max)) | 第157-158页 |
| 2.9 重组酶rAmyM对淀粉水解的应用性研究 | 第158-159页 |
| 本章讨论 | 第159-161页 |
| 本章小结 | 第161-162页 |
| 参考文献 | 第162-167页 |
| 全文总结 | 第167-169页 |
| 主要创新点 | 第169-171页 |
| 下一步工作设想 | 第171-173页 |
| 附录 | 第173-177页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文目录 | 第177-179页 |
| 致谢 | 第179页 |
