| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第12-20页 |
| 1.1 病因研究 | 第12-14页 |
| 1.1.1 生物地球化学说 | 第12页 |
| 1.1.2 饮用水中有机物中毒学说 | 第12-13页 |
| 1.1.3 粮食真菌毒素中毒学说 | 第13-14页 |
| 1.2 链格孢霉及其毒素研究进展 | 第14-18页 |
| 1.2.1 链格孢霉毒素的种类及危害 | 第14-15页 |
| 1.2.2 链格孢霉的产毒条件 | 第15页 |
| 1.2.3 链格孢霉毒素的检测方法 | 第15-17页 |
| 1.2.3.1 薄层法 | 第16页 |
| 1.2.3.2 气相-质谱法 | 第16页 |
| 1.2.3.3 高效液相色谱法 | 第16-17页 |
| 1.2.3.4 液-质联用(HPLC-MS) | 第17页 |
| 1.2.3.5 酶联免疫吸附测定法 | 第17页 |
| 1.2.4 链格孢霉与大骨节病之间的联系 | 第17-18页 |
| 1.3 植物内生真菌的研究进展 | 第18页 |
| 1.4 本课题的研究意义 | 第18-20页 |
| 第二章 实验菌种的鉴定 | 第20-27页 |
| 2.1 实验菌种 | 第20页 |
| 2.2 实验仪器与试剂 | 第20-21页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第20页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第20-21页 |
| 2.3 实验方法 | 第21-23页 |
| 2.3.1 菌种的形态学观察 | 第21页 |
| 2.3.2 实验菌种的ITS序列分析 | 第21-23页 |
| 2.3.2.1 基因组DNA的提取 | 第21-22页 |
| 2.3.2.2 PCR扩增 | 第22页 |
| 2.3.2.3 凝胶电泳 | 第22-23页 |
| 2.3.2.4 纯化回收 | 第23页 |
| 2.3.2.5 测序及分析 | 第23页 |
| 2.4 实验结果 | 第23-25页 |
| 2.4.1 显微形态学观察 | 第23-24页 |
| 2.4.2 菌株的ITS(Internal Transcribed Spacer)鉴定 | 第24-25页 |
| 2.5 讨论 | 第25-27页 |
| 第三章 链格孢霉代谢产物中不同极性提取物的粗分离及其对软骨细胞的作用 | 第27-64页 |
| 3.1 实验材料及仪器设备 | 第27-30页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第27页 |
| 3.1.2 实验试剂及其配制方法 | 第27-29页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第29-30页 |
| 3.2 实验方法 | 第30-37页 |
| 3.2.1 菌株的发酵及其代谢产物的提取 | 第30-31页 |
| 3.2.1.1 摇瓶发酵 | 第30页 |
| 3.2.1.2 代谢产物中不同极性有机溶剂的提取 | 第30页 |
| 3.2.1.3 菌株代谢产物中石油醚、乙醚提取物的粗分离 | 第30-31页 |
| 3.2.1.4 乙醚粗分离提取物的二次分离 | 第31页 |
| 3.2.2 实验分组 | 第31页 |
| 3.2.3 HPLC分析 | 第31-32页 |
| 3.2.4 建立体外兔膝软骨细胞培养体系 | 第32-33页 |
| 3.2.5 三种检测指标 | 第33-37页 |
| 3.2.5.1 MTT法测定软骨细胞存活率 | 第33页 |
| 3.2.5.2 软骨细胞蛋白聚糖与Ⅱ型胶原蛋白表达量的检测 | 第33-34页 |
| 3.2.5.3 RT-PCR检测蛋白聚糖与Ⅱ型胶原蛋mRNA的表达量 | 第34-37页 |
| 3.3 实验结果 | 第37-61页 |
| 3.3.1 石油醚提取物的粗分离成分对兔软骨细胞的作用 | 第37-40页 |
| 3.3.1.1 石油醚提取物的粗分离成分对兔软骨细胞存活率的影响 | 第37-38页 |
| 3.3.1.2 石油醚提取物的粗分离成分对软骨细胞蛋白聚糖及Ⅱ型胶原蛋白mRNA表达量的影响 | 第38-39页 |
| 3.3.1.3 石油醚提取物的粗分离成分对软骨细胞蛋白聚糖及Ⅱ型胶原蛋白表达的影响 | 第39-40页 |
| 3.3.2 乙醚提取物的粗分离成分对兔软骨细胞的影响 | 第40-44页 |
| 3.3.2.1 乙醚提取物的粗分离成分对兔软骨细胞存活率的影响 | 第40-41页 |
| 3.3.2.2 乙醚提取物的粗分离成份对软骨细胞蛋白聚糖及Ⅱ型胶原蛋白mRNA表达量的影响 | 第41-42页 |
| 3.3.2.3 乙醚提取物的粗分离成份对软骨细胞蛋白聚糖及Ⅱ型胶原蛋白表达的影响 | 第42-44页 |
| 3.3.3 不同浓度乙醚提取物中c、d、e组份对兔软骨细胞的影响 | 第44-47页 |
| 3.3.3.1 不同浓度乙醚提取物中c、d、e组份对兔软骨细胞存活率的影响 | 第44-45页 |
| 3.3.3.2 不同浓度乙醚提取物c、d、e组份对软骨细胞蛋白聚糖及Ⅱ型胶原蛋白mRNA表达量的影响 | 第45-46页 |
| 3.3.3.3 不同浓度乙醚提取物c、d、e组份对软骨细胞蛋白聚糖及Ⅱ型胶原蛋白表达的影响 | 第46-47页 |
| 3.3.4 乙醚提取物粗分离成分c、d、e的HPLC分析 | 第47-48页 |
| 3.3.5 乙醚提取物中d组分的二次分离成份对兔软骨细胞的影响 | 第48-52页 |
| 3.3.5.1 d组份的二次分离成份对兔软骨细胞存活率的影响 | 第48-50页 |
| 3.3.5.2 d组份的二次分离成分对软骨细胞蛋白聚糖及Ⅱ型胶原蛋白mRNA表达量的影响 | 第50页 |
| 3.3.5.3 d组份的二次分离成分对软骨细胞蛋白聚糖及Ⅱ型胶原蛋白表达的影响 | 第50-52页 |
| 3.3.6 二级分离成分d1、d2、d3的HPLC分析 | 第52-53页 |
| 3.3.7 样品d2的分段收集 | 第53页 |
| 3.3.8 d2样品中各收集分段对兔软骨细胞的影响 | 第53-57页 |
| 3.3.8.1 d2样品中各收集分段对兔软骨细胞存活率的影响 | 第53-54页 |
| 3.3.8.2 d2各HPLC分段收集物对软骨细胞蛋白聚糖及Ⅱ型胶原蛋白mRNA表达量的影响 | 第54-55页 |
| 3.3.8.3 d2各HPLC分段收集物对软骨细胞蛋白聚糖及Ⅱ型胶原蛋白表达的影响 | 第55-57页 |
| 3.3.9 HPLC保留时间在11min、15min样品的收集 | 第57-58页 |
| 3.3.10 HPLC的收集样品及AME对兔软骨细胞的影响 | 第58-61页 |
| 3.3.10.1 HPLC的收集样品及AME对细胞存活率的影响 | 第58-59页 |
| 3.3.10.2 HPLC的收集样品及AME对软骨细胞蛋白聚糖及Ⅱ型胶原蛋白mRNA表达量的影响 | 第59-60页 |
| 3.3.10.3 收集样品及AME对软骨细胞蛋白聚糖及Ⅱ型胶原蛋白表达的影响 | 第60-61页 |
| 3.4 讨论 | 第61-64页 |
| 总结 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
