| 摘要 | 第8-9页 |
| 缩略表 | 第9-10页 |
| 1. 引言 | 第10-18页 |
| 1.1 黄烷-3-醇的结构、分类与命名 | 第10-11页 |
| 1.2 原花色素的结构、分类与命名 | 第11-13页 |
| 1.3 花色苷的结构和种类 | 第13页 |
| 1.4 黄烷-3-醇、原花色素以及花色苷的合成与特性 | 第13-15页 |
| 1.4.1 生物合成途径 | 第13-14页 |
| 1.4.2 理化性质 | 第14-15页 |
| 1.5 MYB转录因子概况 | 第15-16页 |
| 1.6 实验研究的目的与意义 | 第16-18页 |
| 2. 材料与方法 | 第18-31页 |
| 2.1 试验材料 | 第18页 |
| 2.2 试验仪器 | 第18页 |
| 2.3 生物化学试剂 | 第18-19页 |
| 2.4 试剂配制 | 第19页 |
| 2.5 试验方法 | 第19-30页 |
| 2.5.1 葡萄果实总RNA的提取与纯化 | 第19-21页 |
| 2.5.2 RT-PCR扩增mybPAl以及mybPA2基因 | 第21-22页 |
| 2.5.3 DNA片段的回收纯化 | 第22页 |
| 2.5.4 克隆载体pMD-mybPAl以及pMD-mybPA2的构建与转化 | 第22-23页 |
| 2.5.5 重组质粒的测序鉴定 | 第23页 |
| 2.5.6 构建表达载体 | 第23-25页 |
| 2.5.7 MYBPA1和MYBPA2融合蛋白表达 | 第25页 |
| 2.5.8 SDS-PAGE电泳 | 第25页 |
| 2.5.9 MYBPA1以及MYBPA2融合蛋白的纯化 | 第25-26页 |
| 2.5.10 免疫新西兰白兔 | 第26页 |
| 2.5.11 检测抗体 | 第26页 |
| 2.5.12 测定多酚类物质的含量 | 第26-27页 |
| 2.5.13 蛋白质提取和Western blotting分析 | 第27-28页 |
| 2.5.14 实时荧光定量PCR | 第28-30页 |
| 2.6 数据分析 | 第30-31页 |
| 3. 结果与分析 | 第31-58页 |
| 3.1 提取、反转录葡萄果实总RNA | 第31页 |
| 3.2 MYBPA1、MYBPA2基因的RT-PCR扩增 | 第31-32页 |
| 3.3 重组质粒PMD-MYBPA1、PMD-MYBPA2的鉴定 | 第32-33页 |
| 3.3.1 PCR法快速鉴定重组质粒 | 第32-33页 |
| 3.3.2 mybPA1、mybPA2基因测序结果与分析 | 第33页 |
| 3.4 重组质粒PET-MYBPA1以及PET-MYBPA2的鉴定 | 第33-34页 |
| 3.4.1 PCR快速检测法 | 第33页 |
| 3.4.2 表达载体重组质粒的基因测序结果与分析 | 第33-34页 |
| 3.5 MYBPA1、MYBPA2蛋白理化性质分析 | 第34页 |
| 3.6 MYBPA1、MYBPA2蛋白跨膜区与信号肽分析 | 第34-36页 |
| 3.7 MYBPA1、MYBPA2蛋白在大肠杆菌BL21中的表达 | 第36-40页 |
| 3.7.1 pET-mybPA1、pET-mybPA2生长曲线 | 第36-37页 |
| 3.7.2 MYBPA1、MYBPA2蛋白表达条件的优化 | 第37-40页 |
| 3.8 MYBPA1以及MYBPA2重组蛋白的纯化 | 第40-41页 |
| 3.9 抗体效价检测 | 第41页 |
| 3.10 两种酿酒葡萄各多酚物质含量的变化规律 | 第41-44页 |
| 3.10.1 赤霞珠和霞多丽果实中黄烷醇类多酚含量的变化规律 | 第41-42页 |
| 3.10.2 赤霞珠和霞多丽果实中黄烷-3-醇含量的变化规律 | 第42页 |
| 3.10.3 赤霞珠和霞多丽果实中花色苷含量的变化规律 | 第42-43页 |
| 3.10.4 赤霞珠和霞多丽果实中原花色素含量的变化规律 | 第43-44页 |
| 3.11 赤霞珠和霞多丽各组织发育过程中MYBPA1、MYBPA2蛋白含量的变化规律 | 第44-47页 |
| 3.11.1 赤霞珠各组织中MYBPA1、MYBPA2蛋白含量的变化规律 | 第44-45页 |
| 3.11.2 赤霞珠和霞多丽果实发育过程中MYBPA1蛋白含量的变化 | 第45-46页 |
| 3.11.3 赤霞珠和霞多丽果实发育过程中MYBPA2蛋白含量的变化 | 第46-47页 |
| 3.12 赤霞珠和霞多丽果实中MYBPA1以及MYBPA2基因的表达规律 | 第47-48页 |
| 3.12.1 赤霞珠和霞多丽果实中MybPA1基因的表达规律 | 第47页 |
| 3.12.2 赤霞珠和霞多丽果实中MybPA2基因的表达规律 | 第47-48页 |
| 3.13 赤霞珠和霞多丽果实中类黄酮类物质合成相关酶ANR、ANS、DFR、LAR1和LAR2的表达规律 | 第48-52页 |
| 3.13.1 赤霞珠和霞多丽果实中ANR的表达规律 | 第48-49页 |
| 3.13.2 赤霞珠和霞多丽果实中ANS的表达规律 | 第49-50页 |
| 3.13.3 赤霞珠和霞多丽果实中DFR的表达规律 | 第50页 |
| 3.13.4 赤霞珠和霞多丽果实中LAR1的表达规律 | 第50-51页 |
| 3.13.5 赤霞珠和霞多丽果实中LAR2的表达规律 | 第51-52页 |
| 3.14 相关性分析 | 第52-58页 |
| 3.14.1 黄烷醇类多酚、原花色素、黄烷-3-醇以及花色苷(赤霞珠)含量的相关性 | 第52-53页 |
| 3.14.2 黄烷醇类多酚、原花色素、黄烷-3-醇以及花色苷(赤霞珠)与ANR、ANS、DFR、LAR1以及LAR2等基因的相关性 | 第53-54页 |
| 3.14.3 mybPA1基因、MYBPA1蛋白、mybPA2基因以及MYBPA2蛋白的表达与黄烷醇类多酚、原花色素、黄烷-3-醇以及花色苷(赤霞珠)含量的相关性 | 第54-55页 |
| 3.14.4 mybPA1基因、MYBPA1蛋白、mybPA2基因以及MYBPA2蛋白的表达与ANR、ANS、DFR、LAR1以及LAR2的相关性 | 第55-57页 |
| 3.14.5 赤霞珠和霞多丽果实中MYBPA1蛋白、MYBPA2蛋白、mybPA1基因以及mybPA2基因间的相关性 | 第57-58页 |
| 4. 讨论 | 第58-60页 |
| 5. 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| Abstract | 第68-69页 |
| 致谢 | 第70-72页 |
| 附录 | 第72-82页 |
