| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 缩略词及符号说明表 | 第8-12页 |
| 1 引言 | 第12-17页 |
| 1.1 小RNA病毒的蛋白结构特点 | 第12-13页 |
| 1.2 小RNA病毒2A在细胞中的定位 | 第13-14页 |
| 1.3 小RNA病毒2A蛋白的功能研究概况 | 第14-16页 |
| 1.3.1 初级切割病毒编码的多聚蛋白 | 第14页 |
| 1.3.2 2A诱导细胞凋亡 | 第14-15页 |
| 1.3.3 促进病毒RNA的复制 | 第15页 |
| 1.3.4 抑制宿主细胞蛋白合成 | 第15-16页 |
| 1.4 小G蛋白家族的研究概况 | 第16页 |
| 1.5 选题的目的和意义 | 第16-17页 |
| 2 试验研究 | 第17-26页 |
| 2.1 试验材料 | 第17-18页 |
| 2.1.1 毒株、菌种及试验动物 | 第17页 |
| 2.1.2 主要试剂及耗材 | 第17页 |
| 2.1.3 血清 | 第17-18页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第18页 |
| 2.2 方法 | 第18-26页 |
| 2.2.1 2A蛋白生物信息学分析 | 第18页 |
| 2.2.2 DHAV-1的2A2、2A3蛋白原核表达及多克隆抗体制备 | 第18-21页 |
| 2.2.3 2A2和2A3蛋白完整性、独立性试验 | 第21-22页 |
| 2.2.4 2A1的自我剪切试验 | 第22-23页 |
| 2.2.5 2A2诱导鸭胚成纤维细胞凋亡 | 第23-25页 |
| 2.2.6 2A2蛋白GTP酶活性试验 | 第25-26页 |
| 3 结果 | 第26-52页 |
| 3.1 2A基因的生物信息学分析 | 第26-30页 |
| 3.1.1 DHAV-1多重蛋白质序列比对 | 第26-27页 |
| 3.1.2 DHAV-12A蛋白多重蛋白质序列比对 | 第27-29页 |
| 3.1.3 DHAV-1的2A2蛋白进化树构建 | 第29页 |
| 3.1.4 DHAV-1的2A2蛋白同源建模 | 第29-30页 |
| 3.2 2A2和2A3蛋白的克隆和原核表达及纯化 | 第30-37页 |
| 3.2.1 2A2和2A3基因PCR扩增 | 第30页 |
| 3.2.2 2A2和2A3基因的T克隆及亚克隆 | 第30-32页 |
| 3.2.3 2A2和2A3蛋白的表达及纯化 | 第32-36页 |
| 3.2.4 2A1、2A2和2A3蛋白的多抗制备 | 第36-37页 |
| 3.3 2A2和2A3蛋白是两种不同的蛋白 | 第37-39页 |
| 3.3.1 免疫沉淀试验 | 第37-39页 |
| 3.3.2 间接免疫荧光试验 | 第39页 |
| 3.4 2A1自我切割试验 | 第39-42页 |
| 3.4.1 RFP和RFP-2A1基因的PCR扩增 | 第39-40页 |
| 3.4.2 重组质粒pRFP-EGFP和pRFP-2A1-EGFP的酶切鉴定 | 第40页 |
| 3.4.3 重组质粒转染细胞后荧光的观察 | 第40-41页 |
| 3.4.4 免疫印迹分析 | 第41-42页 |
| 3.5 2A2蛋白诱导细胞凋亡试验 | 第42-49页 |
| 3.5.1 构建重组质粒pcDNA3.1-2A2 | 第42-43页 |
| 3.5.2 免疫荧光检测2A2蛋白的真核表达试验 | 第43-44页 |
| 3.5.3 真核表达的2A2蛋白的免疫印迹试验 | 第44页 |
| 3.5.4 细胞形态的观察 | 第44-45页 |
| 3.5.5 DNA Ladder法检测细胞凋亡 | 第45-46页 |
| 3.5.6 细胞核形态变化 | 第46-47页 |
| 3.5.7 TUNEL法检测细胞凋亡 | 第47-48页 |
| 3.5.8 流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第48-49页 |
| 3.6 2A2蛋白GTP酶活性测定 | 第49-52页 |
| 3.6.1 2A2蛋白纯化 | 第49-50页 |
| 3.6.2 磷酸盐标准品的制备 | 第50-51页 |
| 3.6.3 酶样品的测定 | 第51页 |
| 3.6.4 GTP酶活力计算 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-56页 |
| 4.1 2A蛋白的生物信息学特性分析 | 第52页 |
| 4.2 2A2和2A3蛋白的原核表达与纯化及免疫印迹试验 | 第52-53页 |
| 4.3 鼠或兔抗2A1、2A2和2A3蛋白多克隆抗体的制备 | 第53页 |
| 4.4 2A2和2A3蛋白完整性、独立性试验 | 第53-54页 |
| 4.5 2A2蛋白诱导DEF凋亡试验 | 第54-55页 |
| 4.6 2A1蛋白的自我切割试验 | 第55页 |
| 4.7 2A2蛋白的GTP酶活性试验 | 第55-56页 |
| 5 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 攻读硕士学位期间从第一作者身份发表的文章 | 第65页 |
