| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 常用英文缩略词表 | 第7-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-15页 |
| 1 与疱疹病毒感染吸附有关的主要基因及受体 | 第11-12页 |
| 2 疱疹病毒gC的主要功能 | 第12-13页 |
| 2.1 gC介导病毒吸附到宿主细胞 | 第12页 |
| 2.2 gC参与病毒的增殖和释放 | 第12页 |
| 2.3 gC与病毒毒力有关 | 第12-13页 |
| 3 疱疹病毒基因缺失疫苗 | 第13-14页 |
| 3.1 基因缺失疫苗的定义 | 第13页 |
| 3.2 基因缺失疫苗的构建与筛选 | 第13-14页 |
| 3.3 基因缺失疫苗的研究进展 | 第14页 |
| 4 选题目的及意义 | 第14-15页 |
| 第二部分 试验研究 | 第15-45页 |
| 第一章 鸭瘟病毒gC介导的吸附感染宿主细胞的特性研究 | 第15-27页 |
| 1 试验材料 | 第15-17页 |
| 1.1 毒株、质粒、抗体及鸭胚 | 第15页 |
| 1.2 分子生物学试剂和耗材 | 第15-16页 |
| 1.3 常用实验试剂及配制 | 第16-17页 |
| 1.3.1 细胞培养及病毒核酸基因组DNA提取用溶液 | 第16页 |
| 1.3.2 SDS-PAGE及western blot常用液体 | 第16-17页 |
| 1.4 主要仪器 | 第17页 |
| 2 试验方法 | 第17-20页 |
| 2.1 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测DPV-△gC-EGFP、DPV-CHv方法的建立 | 第17-18页 |
| 2.1.1 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR引物设计 | 第17页 |
| 2.1.2 制备标准品 | 第17页 |
| 2.1.3 构建SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR标准曲线 | 第17-18页 |
| 2.2 gC对病毒吸附的影响 | 第18-19页 |
| 2.2.1 病毒吸附能力的测定 | 第18页 |
| 2.2.2 吸附能力的差异对病毒增殖的影响 | 第18-19页 |
| 2.3 肝素、肝素酶对病毒吸附感染宿主细胞的影响 | 第19页 |
| 2.4 DPV-gC与HS亲和力的测定 | 第19-20页 |
| 2.4.1 DPV-gB、DPV-gC、DPV-gE原核表达蛋白的制备 | 第19-20页 |
| 2.4.2 重组表达蛋白与HS亲和力试验 | 第20页 |
| 3 试验结果 | 第20-24页 |
| 3.1 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR的建立及标准曲线的绘制 | 第20-22页 |
| 3.1.1 检测EGFP基因实时荧光定量PCR方法及标准曲线 | 第20-21页 |
| 3.1.2 检测gC基因实时荧光定量PCR方法及标准曲线 | 第21-22页 |
| 3.2 DPV-AgC-EGFP与DPV-CHv的宿主细胞吸附能力 | 第22-23页 |
| 3.3 肝素和肝素酶对病毒吸附感染宿主细胞的影响 | 第23页 |
| 3.4 DPV-gC结合HS的能力检测 | 第23-24页 |
| 4 分析与讨论 | 第24-27页 |
| 4.1 病毒定量的方法 | 第24-25页 |
| 4.2 鸭瘟病毒gC介导的的吸附感染宿主细胞的特性 | 第25-27页 |
| 第二章 鸭瘟病毒gC~-/TK~-双基因缺失株构建及部分生长特性 | 第27-45页 |
| 1 试验材料 | 第27-28页 |
| 1.1 毒株 | 第27页 |
| 1.2 菌株 | 第27页 |
| 1.3 分子生物学试剂和耗材 | 第27页 |
| 1.4 常用实验试剂及配制 | 第27-28页 |
| 1.4.1 细胞培养及病毒核酸基因组DNA提取用溶液 | 第27页 |
| 1.4.2 大肠杆菌感受态细胞制备及转化用溶液 | 第27-28页 |
| 1.4.3 琼脂糖凝胶电泳相关溶液 | 第28页 |
| 1.5 主要仪器 | 第28页 |
| 2 试验方法 | 第28-34页 |
| 2.1 Red重组敲除gC基因 | 第28-31页 |
| 2.1.1 RCR引物设计 | 第28页 |
| 2.1.2 同源打靶片段RCR扩增 | 第28页 |
| 2.1.3 RCR产物回收 | 第28-29页 |
| 2.1.4 含pKD46和DPV CHv-BAC-G感染性克隆DH10B感受态的制备 | 第29页 |
| 2.1.5 电转化线性打靶片段gC左臂-FRT-kana-FRT-gC右臂 | 第29-31页 |
| 2.2 拯救重组病毒DPV CHv-BAC-G△gC | 第31页 |
| 2.2.1 中量提取DPV CHv-BAC-G△gC | 第31页 |
| 2.2.2 拯救DPV CHv-BAC-G△gC重组病毒 | 第31页 |
| 2.2.3 重组病毒DPV CHv-BAC-G△gC的鉴定 | 第31页 |
| 2.3 DPV CHv-BAC-G△gC的gC回复突变株构建 | 第31-33页 |
| 2.3.1 gC-kana线性片段的获取 | 第31-32页 |
| 2.3.2 第一轮Red重组（将gC-kana重组到CHv-BAC-G△gC基因组） | 第32-33页 |
| 2.3.3 第二轮重组（pCP20去除kana抗性） | 第33页 |
| 2.3.4 RFLP分析 | 第33页 |
| 2.3.5 CHv-BAC-G△gCR回复突变株的拯救及拯救病毒的鉴定 | 第33页 |
| 2.4 CHv-BAC-G△gC、CHv-BAC-G△gCR的体外生物学特性初步研究 | 第33-34页 |
| 2.4.1 空斑试验 | 第33页 |
| 2.4.2 一步生长曲线 | 第33-34页 |
| 3 试验结果 | 第34-43页 |
| 3.1 Red重组敲除gC基因 | 第34页 |
| 3.2 DPV CHv-BAC-G△gC的拯救及拯救病毒的鉴定 | 第34-36页 |
| 3.3 gC回复突变株DPV CHv-BAC-G△gCR的构建 | 第36-39页 |
| 3.3.1 gC-kana线性片段的获取 | 第36-37页 |
| 3.3.2 CHv-BAC-G△gCR回复突变株第一轮Red重组及鉴定 | 第37页 |
| 3.3.3 CHv-BAC-G△gCR回复突变株第二轮重组及鉴定 | 第37页 |
| 3.3.4 RFLP分析 | 第37-39页 |
| 3.4 gC回复突变株DPV CHv-BAC-GAgCR病毒的拯救及鉴定 | 第39-40页 |
| 3.5 DPV CHv-BAC-G△gC、DPV CHv-BAC-G△gCR的生物学特性初步研究 | 第40-43页 |
| 3.5.1 空斑试验 | 第40-42页 |
| 3.5.2 一步生长曲线测定 | 第42-43页 |
| 4 分析与讨论 | 第43-45页 |
| 4.1 重组病毒的构建 | 第43-44页 |
| 4.2 鸭瘟病毒gC~-/TK~-双基因缺失株部分生长特性 | 第44-45页 |
| 第三部分 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 附表 | 第54-59页 |
