| 中文摘要 | 第11-13页 |
| ABSTRACT | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-26页 |
| 1.1 重金属的生物毒性 | 第15页 |
| 1.2 金属硫蛋白 | 第15-19页 |
| 1.2.1 金属硫蛋白概述 | 第15-16页 |
| 1.2.2 金属硫蛋白的调控 | 第16-17页 |
| 1.2.3 金属硫蛋白的作用 | 第17-18页 |
| 1.2.4 金属硫蛋白的金属结合模型 | 第18-19页 |
| 1.3 纤毛虫类金属硫蛋白 | 第19-24页 |
| 1.3.1 纤毛虫金属硫蛋白概述和重金属生物积累 | 第19-20页 |
| 1.3.2 纤毛虫金属硫蛋白的结构分析 | 第20-23页 |
| 1.3.3 四膜虫金属硫蛋白的进化假说 | 第23-24页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第24-26页 |
| 第二章 四膜虫Tetrahymena elliotti中金属硫蛋白Te-MTT2-L和Te-MTT2-S基因的鉴定 | 第26-38页 |
| 2.1 前言 | 第26页 |
| 2.2 材料 | 第26-27页 |
| 2.2.1 细胞株和质粒 | 第26页 |
| 2.2.2 试剂与工具酶 | 第26-27页 |
| 2.2.3 实验所需引物 | 第27页 |
| 2.2.4 主要试剂的配制 | 第27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-32页 |
| 2.3.1 四膜虫Tetrahymena elliotti全基因组的提取 | 第27-28页 |
| 2.3.2 四膜虫Tetrahymena elliotti中Te-MTT2-L和Te-MTT2-S的克隆与突变 | 第28-30页 |
| 2.3.3 重组质粒pGST-Te-MTT2-L和pGST-Te-MTT2-S的构建 | 第30-31页 |
| 2.3.4 重组质粒pSUMO-Te-MTT2-L和pSUMO-Te-MTT2-S的构建 | 第31-32页 |
| 2.4 实验结果 | 第32-36页 |
| 2.4.1 Te-MTT2-L和Te-MTT2-S的生物信息学分析 | 第32-33页 |
| 2.4.2 Te-MTT2-L基因的克隆和模块预测 | 第33-34页 |
| 2.4.3 Te-MTT2-S基因的克隆和模块预测 | 第34页 |
| 2.4.4 pMD-18T-Te-MTT2-L、pMD-18T-Te-MTT2-S的重组鉴定和终止密码子的突变 | 第34-35页 |
| 2.4.5 重组质粒pGST-Te-MTT2-L、pSUMO-Te-MTT2-L和pGST-Te-MTT2-S、pSUMO-Te-MTT2-S的鉴定 | 第35-36页 |
| 2.5 讨论 | 第36-38页 |
| 第三章 四膜虫Tetrahymena elliotti中金属硫蛋白Te-MTT2-L和Te-MTT2-S在大肠杆菌中的表达和纯化 | 第38-48页 |
| 3.1 前言 | 第38页 |
| 3.2 材料 | 第38-39页 |
| 3.2.1 细胞株和质粒 | 第38页 |
| 3.2.2 试剂与工具酶 | 第38-39页 |
| 3.2.3 主要试剂的配制 | 第39页 |
| 3.3 实验方法 | 第39-42页 |
| 3.3.1 GST-Te-MTT2和SUMO-Te-MTT2表达条件的优化 | 第39页 |
| 3.3.2 GST-Te-MTT2和SUMO-Te-MTT2在大肠杆菌中的可溶性分析 | 第39-40页 |
| 3.3.3 GST-Te-MTT2相SUMO-Te-MTT2的Western-blotting检测 | 第40页 |
| 3.3.4 GST-Te-MTT2和SUMO-Te-MTT2的纯化 | 第40-42页 |
| 3.3.5 SUMO-Te-MTT2-L和SUMO-Te-MTT2-S热稳定性的检测 | 第42页 |
| 3.4 实验结果 | 第42-47页 |
| 3.4.1 GST-Te-MTT2和SUMO-Te-MTT2表达条件的优化 | 第42-44页 |
| 3.4.2 GST-Te-MTT2和SUMO-Te-MTT2在大肠杆菌中的可溶性分析 | 第44-45页 |
| 3.4.3 GST-Te-MTT2和SUMO-Te-MTT2的Western-blotting检测 | 第45页 |
| 3.4.4 GST-Te-MTT2和SUMO-Te-MTT2的纯化 | 第45-46页 |
| 3.4.5 SUMO-Te-MTT2-L和SUMO-Te-MTT2-S热稳定性的检测 | 第46-47页 |
| 3.5 讨论 | 第47-48页 |
| 第四章 重组大肠杆菌对重金属离子的不同响应 | 第48-58页 |
| 4.1 前言 | 第48页 |
| 4.2 材料 | 第48-49页 |
| 4.2.1 细胞株 | 第48页 |
| 4.2.2 试剂 | 第48页 |
| 4.2.3 主要试剂的配制 | 第48页 |
| 4.2.4 器皿的洗涤 | 第48-49页 |
| 4.3 实验方法 | 第49-51页 |
| 4.3.1 重组大肠杆菌的活化培养 | 第49页 |
| 4.3.2 BL21/pGST-Te-MTT2和BL21/pSUMO-Te-MTT2的增殖分析 | 第49-50页 |
| 4.3.3 BL21/pSUMO-Te-MTT2对Cu~(2+)和Cd~(2+)螯合能力的比较 | 第50-51页 |
| 4.4 实验结果 | 第51-56页 |
| 4.4.1 无胁迫条件下BL21/pGST-Te-MTT2和BL21/pSUMO-Te-MTT2的增殖 | 第51-52页 |
| 4.4.2 BL21/pGST-Te-MTT2和BL21/pSUMO-Te-MTT2对Cu~(2+)的耐受性 | 第52-53页 |
| 4.4.3 BL21/pGST-Te-MTT2和BL21/pSUMO-Te-MTT2对Cd~(2+)的耐受性 | 第53-54页 |
| 4.4.4 Cu~(2+)和Cd~(2+)暴露下BL21/pGST-Te-MTT2和BL21/pSUMO-Te-MTT2的增殖 | 第54页 |
| 4.4.5 BL21/pSUMO-Te-MTT2对Cu~(2+)和Cd~(2+)螯合能力的比较 | 第54-56页 |
| 4.5 讨论 | 第56-58页 |
| 总结和展望 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-69页 |
| 附录 | 第69-73页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 个人简况及联系方式 | 第75-77页 |
