禽β-防御素6(AvBD6)组织定位及抗J亚群禽白血病病毒活性研究
| 中文摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第13-28页 |
| ·防御素的研究进展 | 第13-18页 |
| ·防御素的定义及分类 | 第13-15页 |
| ·无脊椎动物防御素 | 第14页 |
| ·植物防御素 | 第14页 |
| ·脊椎动物防御素 | 第14-15页 |
| ·防御素的生物学作用及其机制 | 第15-18页 |
| ·抗菌作用及其机制 | 第15-16页 |
| ·抗病毒作用及其机制 | 第16-17页 |
| ·抗肿瘤作用及其机制 | 第17页 |
| ·细胞毒性其他生物学作用 | 第17-18页 |
| ·防御素畜牧业中的应用 | 第18页 |
| ·禽β-防御素（AvBD）的研究进展 | 第18-24页 |
| ·AvBD分子结构 | 第19页 |
| ·AvBD的组织分布 | 第19-21页 |
| ·呼吸系统 | 第20页 |
| ·消化系统 | 第20页 |
| ·免疫系统 | 第20-21页 |
| ·泌尿生殖系统 | 第21页 |
| ·AvBD的生物学特性 | 第21-22页 |
| ·AvBD的诱导表达 | 第22-24页 |
| ·真核表达系统 | 第22-23页 |
| ·原核表达系统 | 第23页 |
| ·其他表达系统 | 第23-24页 |
| ·AvBD研究展望 | 第24页 |
| ·禽白血病J亚群研究现状 | 第24-27页 |
| ·ALV-J分子病毒学特性 | 第24-25页 |
| ·ALV-J基因组学 | 第25-26页 |
| ·ALV-J的流行病学 | 第26页 |
| ·ALV-J的致病性及危害 | 第26-27页 |
| ·ALV-J的防控 | 第27页 |
| ·本研究目的及意义 | 第27-28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-41页 |
| ·材料 | 第28-29页 |
| ·实验细胞和动物 | 第28页 |
| ·试验用菌种、病毒和载体质粒 | 第28页 |
| ·主要试剂 | 第28-29页 |
| ·主要仪器 | 第29页 |
| ·实验地点 | 第29页 |
| ·AvBD6基因的克隆与表达分析 | 第29-34页 |
| ·AvBD6引物设计与合成 | 第29-30页 |
| ·AvBD6基因的获取 | 第30-31页 |
| ·DH5α感受态细胞的制备 | 第31页 |
| ·连接产物的转化 | 第31页 |
| ·重组质粒pGEX6p1Gal-6 的鉴定 | 第31-32页 |
| ·重组AvBD6在大肠杆菌中的诱导表达 | 第32-33页 |
| ·包涵体的提取与纯化 | 第33页 |
| ·纯化蛋白的Western Blot检测 | 第33-34页 |
| ·AvBD6的组织分布与定位 | 第34-35页 |
| ·AvBD6多克隆抗体制备 | 第34页 |
| ·多克隆抗体效价的测定 | 第34页 |
| ·免疫组织化学方法检测AvBD6组织分布与定位 | 第34-35页 |
| ·检测AvBD6组织表达差异 | 第35-37页 |
| ·AvBD6实时荧光定量PCR引物设计与合成 | 第35页 |
| ·检测SPF鸡AvBD6组织表达差异 | 第35-37页 |
| ·AvBD6阳性重组质粒标准曲线绘制 | 第35-37页 |
| ·SPF鸡AvBD6组织表达差异 | 第37页 |
| ·AvBD6动态表达规律检测 | 第37-38页 |
| ·实验动物、组织样品采集、绘制标准曲线 | 第37-38页 |
| ·检测AvBD6组织器官动态表达规律 | 第38页 |
| ·重组AvBD6蛋白体外抗ALV-J病毒 | 第38-41页 |
| ·原核表达重组AvBD6蛋白的复性 | 第38-39页 |
| ·ALV-J病毒实时荧光定量PCR引物设计与合成 | 第39页 |
| ·复性AvBD6抗ALV-J感染 | 第39-41页 |
| ·鸡胚成纤维细胞（CEF）的制备 | 第39页 |
| ·AvBD6抗ALV-J感染 | 第39-41页 |
| ·ALV-J转录水平检测 | 第41页 |
| ·ALV-J阳性标准品制备及标准曲线绘制 | 第41页 |
| ·检测ALV-J转录水平 | 第41页 |
| 3 实验结果与分析 | 第41-54页 |
| ·鸡AvBD6基因获取与分析 | 第41-43页 |
| ·PCR获取鸡AvBD6基因 | 第41页 |
| ·鸡AvBD6序列分析 | 第41-42页 |
| ·鸡AvBD6基因的遗传进化分析 | 第42-43页 |
| ·鸡AvBD6原核表达载体构建 | 第43-44页 |
| ·鸡AvBD6基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第44-46页 |
| ·鸡AvBD6的SDS-PAGE检测 | 第44-45页 |
| ·鸡AvBD6的Western blot检测 | 第45-46页 |
| ·鸡AvBD6多克隆抗体制备及组织分布检测 | 第46-48页 |
| ·鸡AvBD6多克隆抗体效价的测定 | 第46页 |
| ·鸡AvBD6组织分布及定位 | 第46-48页 |
| ·鸡AvBD6组织表达差异及动态表达规律 | 第48-51页 |
| ·重组AvBD6蛋白体外抗ALV-J病毒 | 第51-54页 |
| ·鸡AvBD6蛋白的复性 | 第51-52页 |
| ·鸡AvBD6重组蛋白体外抗病毒效果检测 | 第52-54页 |
| 4 讨论 | 第54-57页 |
| 5 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
