慢病毒过表达可溶性ST2蛋白对小鼠肺纤维化的抑制作用
| 引言 | 第1-11页 |
| 1 ST2慢病毒载体的构建及鉴定 | 第11-21页 |
| ·实验材料 | 第11-12页 |
| ·载体和菌株 | 第11页 |
| ·主要试剂及试剂的配置 | 第11-12页 |
| ·主要仪器 | 第12页 |
| ·实验方法 | 第12-17页 |
| ·ST2目的基因引物设计与合成 | 第12页 |
| ·PCR扩增ST2目的基因 | 第12-13页 |
| ·载体与PCR产物双酶切 | 第13-14页 |
| ·回收酶切产物 | 第14页 |
| ·连接 | 第14-15页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第15页 |
| ·连接产物的转化 | 第15-16页 |
| ·菌落PCR鉴定阳性克隆 | 第16页 |
| ·双酶切鉴定阳性克隆 | 第16-17页 |
| ·测序鉴定 | 第17页 |
| ·实验结果 | 第17-19页 |
| ·PCR扩增ST2目的基因 | 第17页 |
| ·菌落PCR鉴定重组载体 | 第17-18页 |
| ·双酶切鉴定重组载体 | 第18-19页 |
| ·测序鉴定重组载体 | 第19页 |
| ·小结 | 第19-21页 |
| 2 ST2慢病毒包装 | 第21-30页 |
| ·实验材料 | 第21页 |
| ·细胞 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·主要仪器 | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-26页 |
| ·无内毒素质粒大量提取 | 第21-23页 |
| ·慢病毒包装 | 第23-24页 |
| ·慢病毒滴度检测 | 第24页 |
| ·ST2慢病毒表达检测 | 第24-26页 |
| ·实验结果 | 第26-29页 |
| ·转染细胞荧光蛋白表达 | 第26-27页 |
| ·慢病毒滴度测定 | 第27-28页 |
| ·ST2慢病毒表达检测 | 第28-29页 |
| ·小结 | 第29-30页 |
| 3 ST2慢病毒缓解博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化 | 第30-41页 |
| ·实验材料 | 第30-31页 |
| ·实验动物 | 第30页 |
| ·主要试剂及试剂的配置 | 第30页 |
| ·主要仪器 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-36页 |
| ·动物分组 | 第31页 |
| ·动物模型制作 | 第31页 |
| ·ST2慢病毒干预 | 第31页 |
| ·小鼠生存率和体重变化 | 第31页 |
| ·组织标本收集 | 第31-32页 |
| ·肺组织HE染色 | 第32-33页 |
| ·肺组织天狼猩红染色 | 第33页 |
| ·肺组织羟脯氨酸含量测定 | 第33页 |
| ·肺组织RT-PCR检测 | 第33-35页 |
| ·细胞因子ELISA检测 | 第35页 |
| ·肺纤维化评分标准 | 第35-36页 |
| ·统计学方法 | 第36页 |
| ·实验结果 | 第36-40页 |
| ·ST2在小鼠肺组织中的表达情况 | 第36页 |
| ·ST2对生存率和体重的影响 | 第36-37页 |
| ·ST2对肺部炎症的影响 | 第37-38页 |
| ·ST2对肺纤维化程度的影响 | 第38页 |
| ·ST2对于细胞因子和趋化因子的影响 | 第38-40页 |
| ·小结 | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-44页 |
| 参考文献 | 第44-48页 |
| 附录A 综述 | 第48-57页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 在学研究成果 | 第57-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| Abstract | 第60-62页 |
| 论文摘要 | 第62页 |
