| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-23页 |
| ·几丁质酶 | 第12-17页 |
| ·几丁质 | 第12-13页 |
| ·几丁质的降解方法 | 第13-15页 |
| ·几丁质及其低聚糖的应用 | 第15-17页 |
| ·几丁质酶 | 第17-20页 |
| ·几丁质酶简介 | 第17页 |
| ·几丁质酶的分类 | 第17-18页 |
| ·几丁质酶的催化机理 | 第18页 |
| ·几丁质酶的应用 | 第18-20页 |
| ·几丁质酶的固定化 | 第20-22页 |
| ·酶固定化技术 | 第20页 |
| ·酶固定化方法 | 第20-21页 |
| ·酶固定化载体的研究 | 第21-22页 |
| ·本课题研究的意义及目的 | 第22-23页 |
| 2 几丁质酶的酶学性质分析及突变体的杀线虫研究 | 第23-51页 |
| ·材料与方法 | 第23-36页 |
| ·材料 | 第23-26页 |
| ·菌株和质粒 | 第23页 |
| ·线虫 | 第23页 |
| ·试剂 | 第23-24页 |
| ·培养基 | 第24页 |
| ·溶液 | 第24-25页 |
| ·仪器设备 | 第25-26页 |
| ·pachi基因随机突变库的构建 | 第26-30页 |
| ·易错PCR扩增pachi | 第26-27页 |
| ·易错PCR产物的纯化、酶切与回收 | 第27-28页 |
| ·载体pGEX-6p-1 的制备 | 第28-29页 |
| ·酶连 | 第29页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第29-30页 |
| ·电转化 | 第30页 |
| ·随机突变库质量检测 | 第30页 |
| ·随机突变库的筛选 | 第30页 |
| ·野生型和突变蛋白的诱导表达和纯化 | 第30-31页 |
| ·蛋白SDS-PAGE检测 | 第31-32页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第32-33页 |
| ·几丁质酶野生型Pachi和突变体Pachi_(N35D)酶学性质研究 | 第33-34页 |
| ·N-乙酰氨基葡萄糖标准曲线的绘制 | 第33页 |
| ·几丁质酶活测定 | 第33页 |
| ·几丁质酶野生型和突变体最适反应温度测定 | 第33页 |
| ·几丁质酶野生型和突变体最适pH测定 | 第33-34页 |
| ·几丁质酶野生型和突变体热稳定性测定 | 第34页 |
| ·几丁质酶野生型和突变体pH耐受性测定 | 第34页 |
| ·金属离子对几丁质酶野生型和突变体活性的影响 | 第34页 |
| ·几丁质酶野生型和突变体动力学常数测定 | 第34页 |
| ·几丁质酶野生型和突变体蛋白结构模拟 | 第34-35页 |
| ·几丁质酶突变体对秀丽隐杆线虫的毒性研究 | 第35-36页 |
| ·秀丽隐杆线虫培养 | 第35页 |
| ·几丁质酶突变体对秀丽隐杆线虫致死率的测定 | 第35页 |
| ·几丁质酶突变体对秀丽隐杆线虫繁殖的影响测定 | 第35页 |
| ·几丁质酶突变体对秀丽隐杆线虫幼虫生长的影响测定 | 第35-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-48页 |
| ·pachi基因随机突变库的构建 | 第36-38页 |
| ·高活性突变株的筛选 | 第38页 |
| ·野生型和突变体几丁质酶的纯化表达 | 第38-41页 |
| ·野生型和突变体几丁质酶的酶学性质分析 | 第41-45页 |
| ·几丁质酶突变体Pachi_(N35D)对线虫毒杀、繁殖和生长抑制的影响 | 第45-48页 |
| ·讨论 | 第48-51页 |
| ·几丁质酶突变体酶学性质分析 | 第48-49页 |
| ·几丁质酶突变体杀线虫活性分析 | 第49-50页 |
| ·小结 | 第50-51页 |
| 3 几丁质酶Pachi_(N35D)固定化研究及酶学性质分析 | 第51-62页 |
| ·材料与方法 | 第51-55页 |
| ·材料 | 第51-52页 |
| ·方法 | 第52-55页 |
| ·结果与分析 | 第55-59页 |
| ·固定化酶Im PachiN_(35D)的酶学性质分析 | 第55-57页 |
| ·固定化酶Im Pachi_(N35D)的固定化效率分析 | 第57-58页 |
| ·纳米SiO_2材料的傅里叶红外光谱分析 | 第58-59页 |
| ·纳米SiO_2材料的扫描电镜分析 | 第59页 |
| ·讨论 | 第59-62页 |
| ·固定化酶固定化效率分析 | 第59-60页 |
| ·固定化酶酶学性质分析 | 第60-61页 |
| ·小结 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 研究成果 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
