结核分枝杆菌孤儿反应调节因子Rv0818基因缺失株的构建及功能的初步研究
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 缩略表 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-17页 |
| ·结核病现状 | 第10-11页 |
| ·结核分枝杆菌生物学特性 | 第11页 |
| ·结核疫苗现状 | 第11-12页 |
| ·结核分枝杆菌免疫逃逸机制 | 第12-13页 |
| ·双组份调控系统 | 第13-14页 |
| ·孤儿反应调节因子Rv0818 | 第14-17页 |
| 2 研究目的与意义 | 第17-18页 |
| 3 材料与方法 | 第18-36页 |
| ·材料 | 第18-22页 |
| ·菌株、细胞及载体 | 第18页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第18-19页 |
| ·培养基及抗生素 | 第19页 |
| ·溶液及缓冲液 | 第19-21页 |
| ·引物 | 第21-22页 |
| ·主要仪器 | 第22页 |
| ·方法 | 第22-36页 |
| ·结核分枝杆菌的培养与传代 | 第22-23页 |
| ·结核分枝杆菌全基因组的提取 | 第23页 |
| ·重组p0004s的构建 | 第23-27页 |
| ·重组ph AE159的构建 | 第27-28页 |
| ·重组分枝杆菌噬菌体的诱导 | 第28-29页 |
| ·基因缺失株的构建与鉴定 | 第29-30页 |
| ·结核分枝杆菌Rv0818多克隆抗体的制备 | 第30-32页 |
| ·Rv0818缺失株表型实验 | 第32-36页 |
| 4 结果与分析 | 第36-46页 |
| ·结核分枝杆菌缺失株的构建 | 第36-40页 |
| ·重组p0004s的构建 | 第36-37页 |
| ·重组ph AE159的构建 | 第37-38页 |
| ·重组噬菌体PCR鉴定 | 第38-39页 |
| ·基因缺失株PCR鉴定 | 第39-40页 |
| ·兔抗Rv0818多克隆抗体的制备 | 第40-42页 |
| ·Rv0818原核表达菌株的鉴定 | 第40页 |
| ·Rv0818-his蛋白的纯化 | 第40-41页 |
| ·兔抗Rv0818多克隆抗体检测 | 第41-42页 |
| ·Rv0818缺失株表型实验 | 第42-46页 |
| ·菌落形态学观察 | 第42页 |
| ·NO杀伤实验 | 第42-44页 |
| ·胞内存活实验 | 第44-45页 |
| ·荧光定量PCR | 第45-46页 |
| 5 讨论 | 第46-49页 |
| ·结核分枝杆菌基因缺失平台的构建 | 第46页 |
| ·Rv0818多克隆抗体的制备 | 第46-47页 |
| ·缺失株表型实验 | 第47-49页 |
| 6 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
