| 缩略词一览表 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-9页 |
| ABSTRACT | 第9-13页 |
| 前言 | 第13-19页 |
| 第一章 志贺菌HTRA上调及下调表达株的构建及验证 | 第19-35页 |
| 1. 材料 | 第19-22页 |
| ·菌株及载体 | 第19-20页 |
| ·主要耗材 | 第20-21页 |
| ·实验试剂配方 | 第21-22页 |
| 2 方法 | 第22-28页 |
| ·htrA基因上调、下调表达株的构建 | 第22-25页 |
| ·htrA上调和下调表达株的构建 | 第25-26页 |
| ·HtrA抗体的制备 | 第26-28页 |
| ·Western blot验证突变株 | 第28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-33页 |
| ·htrA上调、下调表达菌株构建及毒力基因的PCR验证 | 第28-30页 |
| ·HtrASA-GST多克隆抗体的制备 | 第30-32页 |
| ·Western Blot检测上调及下调表达效果 | 第32-33页 |
| 4 讨论 | 第33-34页 |
| 5 小结 | 第34-35页 |
| 第二章 HTRA上调表达菌株和下调表达菌株蛋白表达谱的差异分析 | 第35-62页 |
| 1 材料与仪器试剂 | 第35-37页 |
| ·主要仪器与应用软件 | 第35-36页 |
| ·常用溶液的配制 | 第36-37页 |
| 2 方法 | 第37-41页 |
| ·周间质蛋白培养时间的选择及双向样品的制备 | 第37页 |
| ·外膜蛋白样品制备[66] | 第37-38页 |
| ·全菌蛋白样品制备[67]及蛋白定量 | 第38-39页 |
| ·蛋白的纯化 | 第39页 |
| ·双向电泳 | 第39-41页 |
| ·胶内酶切 | 第41页 |
| ·蛋白差异点的MALDI-TOF/TOF质谱检测及数据分析 | 第41页 |
| 3 结果分析 | 第41-56页 |
| ·周间质蛋白培养时间的确选择结果 | 第41-43页 |
| ·周间质蛋白 37℃和 30℃条件下蛋白表达谱比较 | 第43-45页 |
| ·外膜蛋白 37℃条件下双向电泳 | 第45-46页 |
| ·全菌蛋白 37℃条件下双向电泳 | 第46-48页 |
| ·htrA上调表达株与下调表达株诱导前后差异蛋白质谱鉴定结果 | 第48-56页 |
| 4 讨论 | 第56-61页 |
| ·周间质蛋白 | 第56-59页 |
| ·外膜蛋白 | 第59-60页 |
| ·半乳糖代谢相关蛋白 | 第60-61页 |
| 5 小结 | 第61-62页 |
| 第三章 HTRA潜在修饰位点的寻找 | 第62-71页 |
| 1 材料试剂 | 第62页 |
| 2 方法 | 第62-64页 |
| ·HtrA两个蛋白点的分离 | 第62页 |
| ·三步萃取法胶内取点 | 第62-63页 |
| ·LC-MS/MS质谱及数据分析 | 第63页 |
| ·HtrA点突变株的构建 | 第63-64页 |
| ·点突变体的双向电泳 | 第64页 |
| 3 结果分析 | 第64-68页 |
| ·HtrA两个蛋白点的分离 | 第64-65页 |
| ·LC-MS/MS分析两个蛋白点 | 第65-67页 |
| ·HtrA点突变体的双向电泳 | 第67-68页 |
| 4 讨论与小结 | 第68-71页 |
| ·讨论 | 第68-70页 |
| ·小结 | 第70-71页 |
| 总结 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-77页 |
| 附录Ⅰ 各种试剂盒的使用说明书 | 第77-80页 |
| 附录Ⅱ 反应体系 | 第80-81页 |
| 附录Ⅲ 实验中所用常规仪器列表 | 第81-82页 |
| 综述：HTRA蛋白的研究进展 | 第82-89页 |
| 参考文献 | 第84-89页 |
| 个人简历 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
