| 中国农业科学院博士学位论文评阅人、答辩委员会签名表 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-34页 |
| ·Bt 毒素蛋白简介 | 第14-22页 |
| ·Bt 毒素及分类及命名 | 第14-18页 |
| ·3D-Cry 杀虫晶体蛋白的结构及功能 | 第18-21页 |
| ·Cry 毒素的进化 | 第21-22页 |
| ·Cry 毒素在昆虫中肠 BBMV 中的受体 | 第22-31页 |
| ·APN | 第23-28页 |
| ·CAD | 第28-30页 |
| ·ALP | 第30-31页 |
| ·Cry 毒素的作用机理 | 第31-32页 |
| ·昆虫对 Bt 毒素产生抗性的机制 | 第32-33页 |
| ·Bt 毒素蛋白酶水解活性变化 | 第32页 |
| ·酯酶螯合及免疫反应增强 | 第32-33页 |
| ·毒素受体调控机制 | 第33页 |
| ·本研究目的意义 | 第33-34页 |
| 第二章 亚洲玉米螟中肠类钙粘蛋白 Cry1Ab 及 Cry1Ac 结合区域鉴定 | 第34-52页 |
| ·材料与方法 | 第35-45页 |
| ·供试昆虫 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35-36页 |
| ·Cry1Ab 和 Cry1Ac 的生物素标记 | 第36-37页 |
| ·亚洲玉米螟中肠总 RNA 的提取 | 第37-38页 |
| ·cDNA 合成 | 第38页 |
| ·PCR 扩增表达片段序列 | 第38-40页 |
| ·表达载体构建 | 第40-41页 |
| ·表达载体转化克隆菌株及鉴定 | 第41-42页 |
| ·表达载体转入表达菌株 | 第42页 |
| ·ofCAD 多肽片段重组表达及可溶性分析 | 第42-43页 |
| ·ofCAD 多肽片段纯化、脱盐及超滤浓缩 | 第43-44页 |
| ·多肽片段 His-标签抗体杂交 | 第44-45页 |
| ·多肽片段配体杂交 | 第45页 |
| ·结果及分析 | 第45-50页 |
| ·亚洲玉米螟中肠总 RNA | 第45页 |
| ·目的片段的扩增及表达载体的双酶切片段 | 第45-46页 |
| ·融合表达的 ofCAD 多肽片段特性 | 第46-48页 |
| ·His-标签抗体杂交结果 | 第48页 |
| ·Ligand blot | 第48-50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| 第三章 Ac200 高抗个体中 MPR 突变 | 第52-63页 |
| ·材料和方法 | 第52-56页 |
| ·供试昆虫 | 第52-53页 |
| ·主要试剂 | 第53页 |
| ·AC200 高抗个体 MPR 突变体筛查 | 第53页 |
| ·MPR 突变体的表达、纯化 | 第53-54页 |
| ·亚洲玉米螟不同品系的 MPR 与 Cry1Ac 结合测定 | 第54-55页 |
| ·毒力生测 | 第55页 |
| ·亚洲玉米螟不同品系的 MPR 多肽片段生测 | 第55-56页 |
| ·结果及分析 | 第56-61页 |
| ·Ac200 存活个体中 MPR 区域突变体 | 第56-57页 |
| ·原核表达及纯化的 MPR-r2 多肽片段 | 第57-58页 |
| ·MPR、MPR-r2 与 Cry1Ac 的结合能力 | 第58-59页 |
| ·MPR、MPR-r2 多肽片段对 Cry1Ac 毒素的增效作用 | 第59-61页 |
| ·讨论 | 第61-63页 |
| 第四章 亚洲玉米螟碱性磷酸酶基因克隆及免疫定位 | 第63-71页 |
| ·材料和方法 | 第63-66页 |
| ·供试昆虫 | 第63页 |
| ·主要试剂 | 第63-64页 |
| ·主要仪器设备 | 第64页 |
| ·亚洲玉米螟中肠总 RNA 提取及 cDNA 合成 | 第64页 |
| ·亚洲玉米螟中肠碱性磷酸酶基因全长扩增 | 第64页 |
| ·亚洲玉米螟中肠碱性磷酸酶基因序列分析 | 第64-65页 |
| ·亚洲玉米螟中肠碱性磷酸酶（ofALP）单克隆抗体制备 | 第65页 |
| ·石蜡切片制作 | 第65页 |
| ·免疫荧光组织化学 | 第65-66页 |
| ·结果及分析 | 第66-68页 |
| ·亚洲玉米螟幼虫中肠碱性磷酸酶基因序列特征 | 第66-67页 |
| ·免疫荧光定位 | 第67-68页 |
| ·讨论 | 第68-71页 |
| 第五章 ofALP 与 Cry1Ac 毒素的结合研究 | 第71-79页 |
| ·材料和方法 | 第71-76页 |
| ·供试昆虫 | 第71页 |
| ·亚洲玉米螟中肠 BBMV 提取 | 第71-72页 |
| ·Cry1Ac 与 ofALP 的免疫共沉淀 | 第72-75页 |
| ·ALP 酶活力测定 | 第75页 |
| ·BCry1Ac银染检测 Cry1Ac 结合蛋白 | 第75-76页 |
| ·Western Blot 检验结合蛋白中的 ofALP | 第76页 |
| ·结果及分析 | 第76-78页 |
| ·ALP 酶活力 | 第76-77页 |
| ·鉴定 ofALP 为 Cry1Ac 结合蛋白 | 第77-78页 |
| ·讨论 | 第78-79页 |
| 第六章 ofALP 多肽片段生物功能测定 | 第79-86页 |
| ·材料和方法 | 第79-81页 |
| ·供试昆虫 | 第79页 |
| ·主要试剂 | 第79页 |
| ·主要仪器设备 | 第79页 |
| ·ofALP 多肽片段表达 | 第79-80页 |
| ·ofALP 多肽片段 His-标签抗体杂交 | 第80页 |
| ·ofALP 多肽片段配体杂交 | 第80页 |
| ·ofALP 多肽片段生测分析 | 第80-81页 |
| ·结果与分析 | 第81-83页 |
| ·ofALP 多肽片段 | 第81页 |
| ·ofALP 多肽片段对 Cry1Ac 毒素增效活性 | 第81-83页 |
| ·讨论 | 第83-86页 |
| 第七章 亚洲玉米螟幼虫中肠钙粘蛋白、碱性磷酸酯酶基因表达水平 | 第86-94页 |
| ·材料和方法 | 第86-89页 |
| ·供试昆虫 | 第86-87页 |
| ·主要试剂 | 第87页 |
| ·主要仪器 | 第87页 |
| ·亚洲玉米螟中肠总 RNA 提取及 cDNA 合成 | 第87页 |
| ·引物设计 | 第87页 |
| ·qPCR 反应体系及程序 | 第87页 |
| ·引物验证及 2-ΔΔCt法可用性验证 | 第87-88页 |
| ·qPCR 测定 ofalp 及 ofcad 基因表达量 | 第88-89页 |
| ·结果与分析 | 第89-93页 |
| ·引物验证及扩增效率验证 | 第89-91页 |
| ·2~（.ΔΔCt）法可用性验证 | 第91页 |
| ·表达差异分析 | 第91-93页 |
| ·讨论 | 第93-94页 |
| 第八章 结论 | 第94-96页 |
| ·亚洲玉米螟幼虫中 ofCAD 与 Cry1Ac 抗性产生的关系 | 第94-95页 |
| ·亚洲玉米螟幼虫中 ofALP 与 Cry1Ac 抗性产生的关系 | 第95-96页 |
| References | 第96-105页 |
| 致谢 | 第105-106页 |
| 作者简历 | 第106页 |
