| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-14页 |
| 第1章 前言 | 第14-27页 |
| ·O157：H7的研究进展 | 第14-16页 |
| ·O157：H7的来源与进化 | 第15页 |
| ·O157 ：H7的致病机制 | 第15-16页 |
| ·Ⅲ型分泌系统 | 第16-18页 |
| ·LEE和非LEE编码的效应分子 | 第18-21页 |
| ·LEE岛 | 第18-19页 |
| ·LEE和非LEE编码的效应分子 | 第19-21页 |
| ·致病菌与宿主的相互作用 | 第21-22页 |
| ·NleB的研究进展 | 第22-24页 |
| ·λRed同源重组 | 第24-25页 |
| ·本研究的主要内容和意义 | 第25-27页 |
| 第2章 材料与方法 | 第27-48页 |
| ·实验材料 | 第27-35页 |
| ·细胞、菌株及质粒 | 第27-28页 |
| ·引物 | 第28-29页 |
| ·抗体 | 第29-30页 |
| ·主要试剂及设备 | 第30-31页 |
| ·主要溶剂配方 | 第31-35页 |
| ·实验方法 | 第35-48页 |
| ·菌株的保藏与培养 | 第35-36页 |
| ·O157：H7细菌基因组的提取 | 第36页 |
| ·质粒的小量提取 | 第36-37页 |
| ·DNA片段的PCR扩增 | 第37-38页 |
| ·DNA凝胶回收 | 第38-39页 |
| ·DNA的酶切与连接 | 第39页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备和转化(CaCl_2法和电穿孔法) | 第39-41页 |
| ·O157：H7 T3SS缺陷突变株△escR的构建 | 第41页 |
| ·细胞的培养、冻存和复苏 | 第41-42页 |
| ·O157：H7野生株和T3SS缺失突变株△escR感染HeLa细胞 | 第42页 |
| ·细胞的免疫荧光分析 | 第42页 |
| ·NleB1和NleB2表达载体的构建 | 第42-43页 |
| ·IPTG诱导重组蛋白的表达及诱导条件的优化 | 第43-44页 |
| ·Western印迹检测蛋白质的表达 | 第44页 |
| ·抗GST-NleB2小鼠多克隆抗体的制备 | 第44-45页 |
| ·真核细胞转染 | 第45页 |
| ·TRIzol法提取RNA | 第45-46页 |
| ·反转录PCR | 第46-48页 |
| 第3章 O157：H7的NleB2蛋白是可天然表达的 | 第48-54页 |
| ·引言 | 第48页 |
| ·结果和讨论 | 第48-53页 |
| ·原核表达载体pGEX-2TK-NleB2的构建 | 第48-50页 |
| ·可溶性性蛋白GST-NleB2在BL21(DE3)中的表达和纯化 | 第50-51页 |
| ·小鼠抗GST-NleB2多克隆抗体可检测到NleB2蛋白的天然表达 | 第51-53页 |
| ·小结 | 第53-54页 |
| 第4章 Ⅲ型分泌系统缺陷突变株ΔescR的构建及其对HeLa细胞黏附能力的影响 | 第54-61页 |
| ·引言 | 第54-55页 |
| ·结果和讨论 | 第55-59页 |
| ·Ⅲ型分泌系统缺陷株ΔescR的构建 | 第55-57页 |
| ·ΔescR突变株的生长曲线 | 第57-58页 |
| ·ΔescR对HeLa细胞的黏附力减弱 | 第58-59页 |
| ·小结 | 第59-61页 |
| 第5章 NleB1与NleB2是可通过Ⅲ分泌系统分泌并注入到宿主细胞的效应分子 | 第61-69页 |
| ·前言 | 第61-62页 |
| ·结果和讨论 | 第62-67页 |
| ·构建原核表达载体pFLAG-MAC-NleB1和pFLAG-MAC-NleB2 | 第62-65页 |
| ·Flag-NleB1与Flag-NleB2可通过Ⅲ分泌系统分泌 | 第65-66页 |
| ·Flag-NleB1与Flag-NleB2可通过Ⅲ分泌系统注入到HeLa细胞 | 第66-67页 |
| ·小结 | 第67-69页 |
| 第6章 带不同标签的NleB1和NleB2真核表达载体的构建 | 第69-76页 |
| ·前言 | 第69页 |
| ·结果和讨论 | 第69-74页 |
| ·带AcGFP1标签的NleB1和NleB2真核载体的构建及其在HeLa细胞中的表达 | 第69-71页 |
| ·带HA或Myc标签的真核载体的构建 | 第71-73页 |
| ·突变蛋白真核表达载体的构建 | 第73-74页 |
| ·小结 | 第74-76页 |
| 第7章 GAPDH和TRAF2在HEK293细胞中存在相互作用 | 第76-82页 |
| ·前言 | 第76页 |
| ·结果和讨论 | 第76-80页 |
| ·构建pCMV-Myc-GAPDH载体 | 第76-78页 |
| ·构建pCMV-HA-TRAF2载体 | 第78-79页 |
| ·GAPDH和TRAF2在人HEK293细胞中存在相互作用 | 第79-80页 |
| ·小结 | 第80-82页 |
| 第8章 总结 | 第82-84页 |
| ·获得的主要实验结果 | 第82页 |
| ·创新之处 | 第82-83页 |
| ·下一步研究内容 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-88页 |
| 硕士期间发表论文 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
