| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-17页 |
| 1 大肠杆菌表达系统 | 第10-11页 |
| ·大肠杆菌重组表达系统的构成 | 第10-11页 |
| ·影响外源基因在大肠杆菌系统中表达的因素 | 第11页 |
| ·pHY300PLK载体 | 第11页 |
| 2 α-淀粉酶 | 第11-12页 |
| ·α-淀粉酶简介及其应用 | 第11页 |
| ·α-淀粉酶基因启动子、信号肽 | 第11-12页 |
| 3 纤维素酶 | 第12-15页 |
| ·纤维素素酶的组成及分类 | 第13页 |
| ·纤维素酶的作用机理 | 第13-14页 |
| ·纤维素酶基因的克隆和表达 | 第14页 |
| ·DL-3纤维素酶的表达及应用 | 第14-15页 |
| 4 蛋白酶K | 第15-16页 |
| ·蛋白酶简介 | 第15页 |
| ·蛋白酶K及其应用 | 第15-16页 |
| 5 本研究的目的意义 | 第16-17页 |
| 第二章 基于pHY300PLK的分泌表达载体的构建 | 第17-24页 |
| 1 材料与方法 | 第17-20页 |
| ·材料 | 第17-18页 |
| ·菌株及质粒 | 第17-18页 |
| ·工具酶和试剂 | 第18页 |
| ·引物 | 第18页 |
| ·方法 | 第18-20页 |
| ·重组DNA技术和分子克隆技术 | 第18页 |
| ·α-淀粉酶分泌表达质粒pAMY、pAMY1的构建 | 第18-19页 |
| ·EcolipAMY、EcolipAMY1阳性转化子筛选 | 第19页 |
| ·重组菌生长曲线的测定 | 第19页 |
| ·质粒拷贝数的测定 | 第19页 |
| ·转化子表达产物的制备 | 第19页 |
| ·表达产物α-淀粉酶活性测定 | 第19页 |
| ·表达产物SDS-PAGE分析 | 第19-20页 |
| 2 结果与分析 | 第20-23页 |
| ·载体pAMY、pAMY1的构建及α-淀粉酶分泌表达 | 第20-21页 |
| ·Amp基因删除对菌生长的影响 | 第21页 |
| ·Amp基因删除对质粒拷贝数的影响 | 第21-22页 |
| ·Amp基因删除对α-淀粉酶表达的影响 | 第22-23页 |
| 3 讨论 | 第23-24页 |
| 第三章 DL-3纤维素酶的表达 | 第24-31页 |
| 1 材料与方法 | 第24-26页 |
| ·材料 | 第24-25页 |
| ·菌株及质粒 | 第24页 |
| ·引物 | 第24页 |
| ·工具酶和试剂 | 第24-25页 |
| ·方法 | 第25-26页 |
| ·重组DNA技术和分子克隆技术 | 第25页 |
| ·全基因合成 | 第25页 |
| ·纤维素酶表达质粒pCEL的构建 | 第25页 |
| ·重组菌生长曲线的测定 | 第25页 |
| ·E.colipCEL阳性转化子筛选 | 第25页 |
| ·转化子表达产物的制备 | 第25页 |
| ·表达产物纤维素酶活性测定 | 第25-26页 |
| ·表达产物SDS-PAGE分析 | 第26页 |
| 2 结果与分析 | 第26-30页 |
| ·基因合成结果 | 第26-27页 |
| ·转化子E.coli pCEL分泌表达纤维素酶 | 第27-28页 |
| ·E.colipCEL转化子生长曲线 | 第28页 |
| ·纤维素酶活性 | 第28-30页 |
| ·重组大肠杆菌pCEL表达纤维素酶活性 | 第28-29页 |
| ·E.coli PCEL4、7转化子表达纤维素酶活性随时间变化 | 第29-30页 |
| ·表达产物纤维素酶的SDS-PAGE | 第30页 |
| 3 讨论 | 第30-31页 |
| 第四章 蛋白酶K的表达和特性研究 | 第31-39页 |
| 1 材料与方法 | 第31-33页 |
| ·材料 | 第31页 |
| ·菌株及质粒 | 第31页 |
| ·工具酶和试剂 | 第31页 |
| ·仪器与设备 | 第31页 |
| ·方法 | 第31-33页 |
| ·分子克隆技术 | 第31-32页 |
| ·全基因合成 | 第32页 |
| ·蛋白酶K表达质粒pPRO的构建 | 第32页 |
| ·重组蛋白酶K粗酶液制备及蛋白酶K的纯化 | 第32页 |
| ·脱脂牛奶制备 | 第32页 |
| ·活性测定 | 第32页 |
| ·大豆蛋白液制备 | 第32-33页 |
| 2 结果与分析 | 第33-38页 |
| ·全基因合成结果 | 第33-34页 |
| ·重组蛋白酶K的表达 | 第34-35页 |
| ·最适作用温度 | 第35页 |
| ·最适作用pH | 第35-36页 |
| ·pH稳定性 | 第36页 |
| ·酶的添加量对反应的影响 | 第36-37页 |
| ·水解大豆蛋白 | 第37-38页 |
| 3 讨论 | 第38-39页 |
| 第五章 结论 | 第39-41页 |
| 1 分泌表达载体的构建 | 第39页 |
| 2 外源DL-3纤维素酶基因的表达 | 第39页 |
| 3 外源蛋白酶K基因的表达及酶的特性研究 | 第39-41页 |
| 参考文献 | 第41-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 作者简历 | 第49页 |
