| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 第一章 文献综述及前言 | 第11-21页 |
| 1 可再生能源——生物燃料 | 第11-13页 |
| ·现代生物质能源的发展 | 第11-12页 |
| ·从纤维素到生物燃料 | 第12-13页 |
| ·新兴的能源植物——芒 | 第13页 |
| 2 纤维素酶 | 第13-15页 |
| ·纤维素酶的发现 | 第13-14页 |
| ·纤维素酶的组成结构及作用原理 | 第14-15页 |
| 3 未培养微生物中纤维素酶基因的研究 | 第15-18页 |
| ·未培养微生物资源 | 第15页 |
| ·宏基因组学对未培养微生物纤维素酶基因的挖掘 | 第15-18页 |
| ·宏基因组学技术的发展 | 第15-16页 |
| ·瘤胃中微生物纤维素酶基因的研究 | 第16-17页 |
| ·白蚁肠道中微生物纤维素酶基因的研究 | 第17页 |
| ·宏基因组技术在微生物纤维素酶基因上的挖掘应用 | 第17-18页 |
| 4 本论文选题依据、研究目的及技术路线 | 第18-21页 |
| ·选题依据 | 第18-19页 |
| ·研究目的 | 第19页 |
| ·技术路线 | 第19-21页 |
| 第二章 纤维素酶基因的功能验证与分析 | 第21-29页 |
| 1 材料与方法 | 第21-23页 |
| ·试验材料 | 第21页 |
| ·主要试剂、酶和相关引物 | 第21页 |
| ·培养基与溶液 | 第21-22页 |
| ·培养基 | 第21-22页 |
| ·溶液 | 第22页 |
| ·主要仪器 | 第22页 |
| ·宏基因组文库中纤维素酶功能基因的验证 | 第22-23页 |
| ·功能验证β-葡萄糖苷酶活性菌株 | 第22-23页 |
| ·功能验证CMCase活性菌株 | 第23页 |
| ·宏基因组文库中纤维素酶基因的鉴定 | 第23页 |
| ·纤维素酶活性克隆的序列核对与分析 | 第23页 |
| 2 结果与分析 | 第23-28页 |
| ·宏基因组文库中纤维素酶基因的功能验证 | 第23-25页 |
| ·七叶苷平板法验证结果 | 第24页 |
| ·刚果红脱色法验证结果 | 第24-25页 |
| ·以pNPG为底物检验菌株β-葡萄糖苷酶活性 | 第25页 |
| ·基因序列的生物信息学分析 | 第25-28页 |
| ·序列信息 | 第25-26页 |
| ·序列BlastX比对 | 第26页 |
| ·蛋白质预测分析 | 第26-27页 |
| ·信号肽分析预测 | 第27-28页 |
| 3 讨论 | 第28-29页 |
| 第三章 纤维素酶基因的克隆与原核表达 | 第29-38页 |
| 1 材料与方法 | 第29-33页 |
| ·材料 | 第29页 |
| ·主要试剂、工具酶和菌株 | 第29-30页 |
| ·主要试剂 | 第29页 |
| ·工具酶 | 第29-30页 |
| ·菌株及相关载体 | 第30页 |
| ·主要仪器 | 第30页 |
| ·功能基因的克隆 | 第30-33页 |
| ·引物设计 | 第30页 |
| ·碱裂解法质粒提取 | 第30-31页 |
| ·功能基因的PCR扩增 | 第31页 |
| ·DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第31-32页 |
| ·DNA目的片段的回收 | 第32页 |
| ·pET28a(+)质粒载体双酶切 | 第32页 |
| ·酶切产物连接 | 第32页 |
| ·化学法感受态的制备与热激转化 | 第32-33页 |
| ·菌液PCR检测 | 第33页 |
| 2 结果与分析 | 第33-37页 |
| ·质粒提取 | 第33-34页 |
| ·目的基因PCR扩增 | 第34-35页 |
| ·目的片段回收 | 第35页 |
| ·目的基因与载体双酶切 | 第35-36页 |
| ·重组载体菌液PCR检测 | 第36页 |
| ·重组菌株纤维素酶功能验证 | 第36-37页 |
| 3 讨论 | 第37-38页 |
| 第四章 unbifC5蛋白质表达研究 | 第38-49页 |
| 1 材料与方法 | 第38-43页 |
| ·试验材料 | 第38页 |
| ·主要试剂 | 第38-39页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| ·功能蛋白质诱导表达 | 第39页 |
| ·粗酶液提取 | 第39-40页 |
| ·蛋白质SDS-PAGE电泳检测 | 第40页 |
| ·蛋白质纯化 | 第40-41页 |
| ·粗酶液的酶学性质研究 | 第41页 |
| ·β-葡萄糖苷酶酶活大小测定 | 第41-42页 |
| ·产物葡萄糖对β-葡萄糖苷酶活力的影响 | 第42-43页 |
| 2 结果与分析 | 第43-48页 |
| ·unbifC5功能蛋白质诱导表达 | 第43-44页 |
| ·不同浓度IPTG诱导表达结果 | 第43页 |
| ·不同时间诱导表达结果 | 第43-44页 |
| ·不同温度诱导表达结果 | 第44页 |
| ·蛋白质提取、纯化及SDS-PAGE电泳 | 第44-45页 |
| ·粗酶液的酶学性质研究 | 第45-47页 |
| ·β-葡萄糖苷酶最适反应温度的测定 | 第45-46页 |
| ·[3-葡萄糖苷酶最适反应pH的测定 | 第46页 |
| ·粗酶液的热稳定性检测 | 第46-47页 |
| ·粗酶液的pH稳定性检测 | 第47页 |
| ·粗酶液β-葡萄糖苷酶活力测定 | 第47页 |
| ·标准曲线的制作 | 第47页 |
| ·β-葡萄糖苷酶活力大小测定 | 第47页 |
| ·产物葡萄糖对unbifC5 β-葡萄糖苷酶活力大小的影响 | 第47-48页 |
| 3 讨论 | 第48-49页 |
| 第五章 结论、创新点和下一步工作计划 | 第49-51页 |
| 1 结论 | 第49页 |
| 2 创新点 | 第49页 |
| 3 下一步工作计划 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 附录 | 第56-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 作者简介 | 第59页 |