| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-17页 |
| 1 苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis) | 第10页 |
| 2 Bt Cty基因的分类 | 第10-13页 |
| 3 Bt Cty晶体蛋白杀虫机理 | 第13-14页 |
| 4 转Bt Cty基因抗虫棉研究及应用情况 | 第14-15页 |
| ·国外转Bt Cty基因棉取得的成果 | 第14页 |
| ·国内转Bt Cty基因棉的现状 | 第14-15页 |
| ·转Bt Cty基因棉花存在的问题 | 第15页 |
| 5 选题目与意义 | 第15-17页 |
| 第二章 材料与方法 | 第17-27页 |
| 1 实验材料 | 第17-18页 |
| ·目的基因、载体质粒及菌株 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17页 |
| ·实验仪器 | 第17-18页 |
| ·主要溶液及试剂的配制 | 第18页 |
| 2 试验方法 | 第18-27页 |
| ·引物设计合成 | 第18-19页 |
| ·PCR扩增Cry5A目的基因片段 | 第19页 |
| ·pGEX-4T-3+Cry5A载体的构建 | 第19-21页 |
| ·pGEX-4T-3+Cry5A(+)克隆子的筛选及双酶切鉴定 | 第21-23页 |
| ·重组pGEX-4T-3+Cry5A(+)融合蛋白的诱导表达 | 第23-24页 |
| ·重组pGEX-4T-3+Cry5A(+)融合蛋白的纯化 | 第24-25页 |
| ·Cry5A蛋白特异性多隆抗体制备 | 第25-26页 |
| ·转Bt Cry5A基因棉花不同组织、器官中毒蛋白含量 | 第26-27页 |
| 第三章 结果与分析 | 第27-35页 |
| 1 Cry5A基因目的片段的扩增 | 第27页 |
| 2 pGEX-4T-3+Cry5A(+)表达载体的构建及鉴定 | 第27-28页 |
| 3 pGEX-4T-3+Cry5A(+)重组蛋白的表达、纯化与鉴定 | 第28-32页 |
| ·IPTG不同浓度、时间诱导 | 第29-30页 |
| ·IPTG最佳浓度、时间诱导表达 | 第30-31页 |
| ·纯化前、后Cry5A蛋白Western-blot鉴定 | 第31-32页 |
| 4 Cry5A特异性多克隆抗体效价检测、纯化 | 第32-33页 |
| ·Cry5A特异性多克隆抗体效价检测、纯化 | 第32页 |
| ·Cry5A特异性多克隆抗体纯化 | 第32-33页 |
| 5 ELISA方法测定转Cry5A棉不同器官、组织中毒蛋白含量 | 第33-35页 |
| ·纯化Cry5A晶体蛋白作为抗原标准曲线制作 | 第33-34页 |
| ·转Bt Cry5A基因棉花不同器官、组织中毒蛋白含量测定 | 第34-35页 |
| 第四章 讨论 | 第35-38页 |
| 1 Cry5A目的基因获取 | 第35页 |
| 2 pGEX-4T-3+Cry5A(+)原核表达质粒的正确构建 | 第35-36页 |
| 3 Cry5A蛋白表达条件的优化 | 第36页 |
| 4 Cry5A蛋白纯化与免疫印迹分析 | 第36-37页 |
| 5 Cry5A蛋白制备特异性抗体讨论 | 第37-38页 |
| 第五章 结论 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 作者简介 | 第46页 |
